流式核内蛋白染色步骤

使用MultiSciences FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Kit (#IC001)染色步骤如下：

1. 染表面抗体，按说明书条件孵育全血样本孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素（按厂家说明操作），溶血完毕
2. 加入2ml流式染色缓冲液，300-400g离心5分钟，弃去上清
3. 用 3 倍体积的固定/破膜稀释液（#ICD01）稀释固定/破膜浓缩液（#ICC01）制成固定/破膜工作液，注意要新鲜配制，每个样本的用量为 1ml
4. 每管加入1ml固定/破膜工作液（1:3稀释好）涡旋振荡混匀，室温避光孵育30-60分钟
5. 将10×破膜缓冲液（#ICB01）用去离子水 1:9 稀释，制成1×破膜缓冲液（每个样本的用量为 8.5ml）
6. 无需洗涤，直接加入2ml 1×破膜缓冲液（1:9稀释好）300-400g 离心5分钟，弃去上清（可选）重复洗涤一次
7. 用100 ul 1×破膜缓冲液重悬细胞（可选）加入2 ul胞内抗体来源的血清阻断，室温避光孵育15分钟
8. 无需洗涤，体系加入适量的FoxP3抗体或其他核内抗体或等量的同型对照（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书）振荡混匀，室温避光孵育至少30分钟
9. 每管加入2ml 1×破膜缓冲液，300-400g离心5分钟，弃上清（可选）重复洗涤一次
10. 用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析如不能立即检测，用 0.5ml 0.1~4%多聚甲醛重悬，4℃避光保存24小时内上机分析

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