流式常见Th检测实验技能，你会了吗？

Post published:2024-07-16
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一、Th1/Th2/Th17细胞介绍
二、Th1/Th2/Th17细胞检测指标选择
三、流式检测Th1/Th2/Th17细胞实验步骤
四、流式检测Th1/Th2/Th17细胞实验注意事项

流式检测Th1、Th2以及Th17细胞是免疫学研究中的一项重要技术，主要用于检测和分析这些不同亚型的辅助性T淋巴细胞（Th细胞）在免疫应答中的作用和平衡状态。

小科今天给大家带来Th1/Th2/Th17细胞的简要介绍，并讲解其检测指标以及实验所需的一些注意事项。

一、Th1/Th2/Th17细胞介绍

1.Th1细胞：Th1细胞主要介导细胞免疫应答，促进炎症反应和清除胞内病原。它们分泌的细胞因子如IFN-γ、IL-2和TNF-α等，在免疫应答中发挥关键作用。

2.Th2细胞：Th2细胞主要参与体液免疫应答，促进过敏反应和寄生虫感染的清除。它们分泌的细胞因子如IL-4、IL-5和IL-13等，在体液免疫和过敏反应中发挥重要作用。

3.Th17细胞：Th17细胞是近年来发现的一种新的Th细胞亚群，主要分泌IL-17等细胞因子，参与炎症反应和组织损伤。它们在自身免疫性疾病、感染性疾病以及肿瘤等疾病的发生和发展中扮演重要角色。

二、Th1/Th2/Th17细胞检测指标选择

小科查阅相关Th高分文献，帮大家总结了Th1/Th2/Th17细胞常见流式检测指标

人以及大鼠样本Th1/Th2/Th17细胞检测指标

（备注：Th 细胞的表面标志为 CD3+CD4+，而当用 PMA /Ionomycin刺激人和大鼠抗凝血 4 小时，会发现 CD4+的细胞明显减少，甚至消失，这是因为 PMA/Ionomycin 会诱发细胞表面 CD4 分子被内吞。所以通常的做法是用 CD3 和 CD8 反设 CD4 细胞，即 CD3+CD8-的细胞被认为是 CD3+CD4+的细胞。）

小鼠样本Th1/Th2/Th17细胞检测指标

联科生物Th试剂盒

联科Th试剂盒部分引用文献

1、Wang, Hongxing et al. T-Cell Immune Imbalance in Rheumatoid Arthritis Is Associated with Alterations in NK Cells and NK-Like T Cells Expressing CD38. Journal of innate immunity vol. 14,2 (2022): 148-166.

2、Ding Y, Wang Y, Zhang Y, et al. Alpha-linolenic acid improves nasal mucosa epithelial barrier function in allergic rhinitis by arresting CD4+ T cell differentiation via IL-4Rα-JAK2-STAT3 pathway. Phytomedicine. 2023;116:154825.

3、Yu Q, Yu F, Li Q, et al. Anthocyanin-Rich Butterfly Pea Flower Extract Ameliorating Low-Grade Inflammation in a High-Fat-Diet and Lipopolysaccharide-Induced Mouse Model. J Agric Food Chem. 2023;71(31):11941-11956.

4、Li Q, Liu W, Zhang H, et al. α-D-1,3-glucan from Radix Puerariae thomsonii improves NAFLD by regulating the intestinal flora and metabolites. Carbohydr Polym. 2023;299:120197.

三、流式检测Th1/Th2/Th17细胞实验步骤

进行流式检测Th1/Th2/Th17细胞常规的实验步骤由以下六个部分组成

下面是采用联科生物的试剂盒检测人外周血Th1/Th2/Th17细胞具体步骤：

示例：人的外周血Th1/Th2/Th17细胞检测

试剂盒采用了联科生物人Th1/Th2/Th17染色试剂盒

产品名称：Human Th1/Th2/Th17 Staining Kit

货号：KTH001

样本：人的外周血

实验步骤

1、采用肝素抗凝管取血，取125 u L抗凝血至流式管中，加入125 u L不含血清的培养基和1 u L PMA/Ionomycin Mixture (250×)和1 u L BFA/Monensin Mixture (250×)。取125 u L抗凝血和125 u L不含血清的培养基，作为对照。混匀，37℃孵育4 - 6 小时，每隔1 - 2 小时取出震荡混匀。

2、从样本管和对照管中取100 u L 细胞悬液至新的流式管中，加入5 u L Anti-Human CD3, APC-Cy7和5 u L Anti-Human CD8α, PerCP-Cy5.5。震荡混匀，室温避光孵育15分钟。

3、每管加入100 u L FIX & PERM Medium A，震荡混匀，室温避光孵育15分钟。

4、每管加入1 ml预冷1× Flow Cytometry Staining Buffer，300 × g离心5分钟，弃上清。

注：液体尽量倒干净，不要有残留。

5、每管加入 100 u L FIX & PERM Medium B、5 u L Anti-Human IFN-γ, FITC、5 u L Anti-Human IL-4, APC 和 5 u L Anti-Human IL-17A, PE。震荡混匀，室温避光孵育 15 分钟。

6、每管加入 1 m L 1× Flow Cytometry Staining Buffer，300 × g 离心 5 分钟，弃上清。

7、每管加入 500 u L 1× Flow Cytometry Staining Buffer 重悬，上机检测；或者加入 500 u L 1 - 4 %多聚甲醛重悬，2 - 8℃避光，于 24 小时内检测。

实验结果示意图;