进行流式实验时,样本处理至关重要,不当的样本处理会导致实验结果的失败。今天,小科来聊聊血液样本在流式实验中的处理方法。
血液样本是天然的单细胞悬液,包含红细胞、白细胞和血小板等多种成分。其中白细胞细分为有粒白细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)和无粒白细胞(单核细胞和淋巴细胞),是机体免疫系统的关键组成部分。
目前血液样本常见的两种处理方法:一种是裂红法另一种是离心法,该如何选择呢?小科这边将两种方法给大家汇总下。
一、红细胞裂解法
在分析血液样品时,红细胞数量过多会影响细胞群体的分析,因此,我们通常会选择合适的红细胞裂解液进行裂红。在选择裂红试剂的时候我们需要注意试剂是否含固定剂。不含固定剂的试剂作用较为温和,处理后的细胞可继续培养;而含固定剂的试剂作用较为强烈,但裂红效果相对更好,且能提高实验室生物安全性。
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1.优点
- 操作简单,红细胞裂解完全;
- 在裂解过程中,白细胞(如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等)的完整性得到较好保持,从而有利于后续的分析和检测;
- 白细胞的得率相对较高,能够满足多种实验的需求。
2.缺点
- 与密度梯度离心法相比,红细胞裂解法处理后的细胞活性可能较低;
- 红细胞裂解法对裂解时间要求较高,过长或过短均可能影响结果。
3.注意事项
- 裂解时间应在5-15分钟,具体时间按照试剂说明书要求;
- 裂红之后,溶液应当澄清透明;
- 裂红之后宜尽早进行实验,不建议将样本进行储存,容易降低细胞活性,影响实验准确性。
4.联科生物红细胞裂解液
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二、密度梯度离心法
全血样本中不同类型的细胞具有不同的密度,密度梯度离心法即是根据细胞沉降系数的差异,借助淋巴细胞分离液和离心操作分离得到Peripheral Blood Mononuclear Cells(PBMC)。
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1.优点
- 分离效果好,获得的细胞纯净度高;
- 较好地保持细胞活性。
2.缺点
- 实验操作繁琐;
- 离心时间长。
3.注意事项
- 操作全程应尽可能短时间内完成,以免增加死细胞数;
- 用淋巴细胞分离液分离PBMC时,离心机转速的增加和减少要均匀、平稳,使保持清晰的界面;
- 不同种属PBMC的漂浮密度不同,例如人的PBMC是在1.077 g/mL、小鼠、大鼠的则是在1.084 g/mL,这些是不能混用的。
小科语录:
- 实验重点在于快速分析白细胞总体情况,进行大量样本的初步筛查,建议使用裂红素处理;
- 如果需要获得高纯度的细胞并保持细胞活性,或者需要分离多种类型的细胞或颗粒,建议选择密度梯度离心法。