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作者：联科生物 发布日期：2016-12-26 09:30
 做WB之前，样本的处理及保存至关重要，本章节整理WB各种样本，如细胞、组织、植物和细菌样本的处理及保存方法，供参考。 ? 细胞样本 1、 悬浮细胞 1） 把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清； 2） 加入PBS轻轻吹打，1500rpm离心3min，弃去上清； 3） 反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。 2、 贴壁细胞 1） 胰酶消化：用胰酶将细胞消化后，收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清； 2） 加入PBS轻轻吹打，1500rpm离心3min，弃去上清； 3） 反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。 3、 细胞刮子收集细胞 某些蛋白（即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测），直接用细胞刮子刮下细胞。 1） 将刮下的细胞收集到离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清； 2） 加入PBS轻轻吹打，1500rpm离心3min，弃去上清； 3） 反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。 动物组织样本 1） 取下合适组织样品后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗，尽量除尽残留血液，用滤纸把多余PBS吸取干净； 2） 把组织分成约100mg大小（依据实验目的需要进行调整），用锡纸分别包装好或者用冻存管装好，于-80度或者液氮中保存。 植物样本 取得待测植物样品后，用蒸馏水把泥土漂洗干净，用滤纸把多余水分吸取干净，分装成合适大小于-80度或者液氮中保存。 细菌样本 1） 细菌培养完成后，10000rpm离心5min收集细菌，加入PBS吹打，10000rpm离心5min，弃去上清； 2） 反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。 温馨提示：以上样本检测磷酸化蛋白，建议新鲜样本提取蛋白，提取后的蛋白加Loding buffer煮沸10min，如果短期内做可以-20度保存，长时间-80度保存。请在3个月内进行，长时间保存样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。 注意： （1）提取胞浆、胞核蛋白的样品应尽量采用新鲜样品，冻存样品提取的胞核蛋白可能会减少； （2）样本保存在-80或液氮也要避免反复冻融，建议尽快检测； （3）长距离运送样品时采用干冰或者液氮。 WB技术服务电话咨询：400-6721-600 邮箱：inf@liankebio.com 杭州联科生物技术服务股份有限公司 |
