解开囊泡（exosome）蕴藏的秘密

Post published:2014-10-01
Post category:生物资讯
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作者：QIAGEN官网发布日期：2014-10-01 15:00

近年来，exosome这种小囊泡正得到广泛的关注。exosome是直径约为30-150nm的小囊泡，在30年前被人们所发现。exosome天然存在于所有体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，且其蛋白、RNA和脂肪成分特异，早期的研究认为，exosome执行蛋白运输功能，特异靶定受体细胞，交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。直到2007年，研究人员发现exosome也运输核酸，参与细胞间通讯。至此，这种小囊泡才被人重视，并成为热门的研究对象。

因此，exosome有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。今年8月，美国NIH为24个细胞外（exRNA）通讯方面的研究项目提供1700万美元的资助，主要关注exRNA作为潜在的生物标志物和疗法的临床实用性。

细胞外微泡，运载RNA（包括mRNA、miRNA、lncRNA）、DNA及蛋白质，为细胞间信号交流起着重要作用。QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma MaxiKit大幅简化细胞外RNA纯化，让您能更快、更准确地了解细胞发出的信息，尽早提出您的生物学见解。

exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit采用亲和性膜离心柱，可从exosomes和来自血清或血浆中的其他细胞外微泡中高效分离RNA。Maxi规格的分离柱可处理多达4 ml的大体积样本，因此能够可靠检测低丰度RNA。该试剂盒能够快速、便利的获得结果，十分适用于敏感的下游应用。
试剂盒优势：
可处理大体积样本，可灵敏检测低丰度转录本

1小时内即可完成囊泡RNA的分离

采用离心柱纯化流程，能够平行处理多个样本

可从血清或血浆中分离miRNA和mRNA
性能
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比，不仅速度更快，并且产物纯度更高。扫描电镜显示，虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡，但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构。

此外，Bioanalyzer分析显示，exoRNeasy和传统超速离心方法分离得到的大RNA和小RNA长度和产量相似。

通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析，结果显示，exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA，包括细胞外囊泡的miRNA，且不含细胞。
原理
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法，能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术，通过离心柱和特制缓冲液，从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程，从血清/血浆样本到RNA产物，只需1小时。
操作流程

从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步：纯化exosomes和分离RNA在exosomes纯化步骤，预过滤的血浆（不包含大于0.8 μM的微粒）与Buffer XBP混合，加至exoEasay亲和性膜离心柱上，结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。