DNA实验基础知识:质粒提取

—— 导论 —— 已经提出过许多方法用于从细菌中提取纯质粒DNA,这些方法都含有以下3个步骤: ? 细菌培养物的生长。 ? 细菌的收获和裂解 ? 质粒DNA的纯化。 (一)细菌培养物的生长 从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长),然后从中纯化质粒,质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体(如pUC系列)…

抗体抗原实验该如何选择抗体?

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合 适的抗体, 需要考虑如下几种因素: 1. 分析或应用的类型 2. 样本蛋白的结构性质 3. 样本的种属 4. 抗体宿主的种类 5. 抗体的标记和检测 荧光素 激发波 分子量 Blue 440 Fluoresein(FITC) 495 390 Green 528 Rhodamine(TRITC) 550 444 Red 620 …

如何用淋巴细胞分离液分离单个核细胞?

1)分离外周血中的单个核细胞(PBMC) 1.抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中,加等量含5~10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上,室温中,水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层:最上面是血浆,血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC,淋巴细胞分离液层和最下面的红细胞层之间是粒细胞层,又成为棕黃层。 2.吸去最上层的血浆,收集血…

流式细胞术:细胞凋亡实验详解

细胞凋亡和坏死是两种不同的细胞死亡方式,科学家们通过形态和分子变化来区分它们。常见的凋亡检测方法包括光学显微镜、荧光显微镜观察,Annexin V法检测磷脂外翻,检测线粒体膜电位变化,DNA片断化分析等。TUNEL法和Caspase-3活性检测也非常重要,能帮助科学家深入了解细胞凋亡的过程。

ELISA试剂盒实验前都要做哪些准备?

成功总是青睐有准备的人,ELISA试剂盒检测是否能完美的完成,需要提前做好准备,具体应该做哪些准备呢? 1. 仔细阅读说明书,确定试剂盒在有效期内。 2. 按说明书确定所有试剂是否齐全,完整的Sunny ELISA试剂盒包含预包被酶标板,检测抗体、链霉亲合素标记的HRP、标准品、标准品稀释液、TMB显色液、终止液、洗液等10个组分。另外要确认试剂盒以外的材料是否齐全,如酶标仪、移液器及枪头、加样槽…

多色流式中荧光补偿调节方法与步骤

尽管多色流式细胞术目前已被广泛应用,但是荧光补偿的准确调节却是很多人实验中遇到的一大难题。 我们先来看看为何要做荧光补偿这个动作? 每一种荧光分子都发射某一特定波长范围内的光,然而这些荧光的发射光谱会发生重叠,“荧光补偿”是指修正荧光渗漏的过程,从某个探测器除去除匹配荧光以外的其他任何荧光信号的过程即为荧光补偿。荧光补偿过程从原理上来说相对简单,但实际上涉及许多精细、敏感的…