流式操作步骤：表面抗体染色
细胞样本 取100ul细胞悬液（细胞计数后用流式染色缓冲液 Flow Cytometry Staining Buffer调整浓度为1×107/mL） 加入适量的表面抗体，室温避光孵育15min（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书） 加入1~2ml流式染色缓冲液，300g离心5min弃上清 用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析如不能立即检测，用0.5ml 0.1~4%多聚…
2019-10-25
Th17 检测原理和样品处理方法
组分25T抗人 CD3, FITC (克隆号：OKT3)150 μl抗人 CD8α, PerCP-Cy5.5 (克隆号：RPA-T8)150 μl抗人 IL-17A, PE (克隆号：(64DEC17)150 μl佛波酯/离子霉素混合物 (250×)100 μl布雷非德菌素 A/莫能霉素混合物 (250×)100 μl固定破膜剂试剂…
2019-10-13
全血 Foxp3 实验操作步骤
1. 取 100ul 全血，按照细胞表面抗原染色方法标记 CD4 和 CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。4 ℃孵育 30分钟。 2. 用去离子水（不能用 PBS）将溶血素稀释成 1×。每管用量为 2ml。 3. 染色完的全血不用洗，加 2ml 稀释好的溶血素，迅速混匀，静置 8~10 分钟，观察溶液透亮后用预冷 PBS 溶液…
2018-12-10
人 Treg 试剂盒操作步骤
制备 PBMC，并调整细胞浓度至 107/mL。 在每个流式上样管中加入 100 μL 准备好的细胞悬液，细胞数约为 1 × 106 个。 按照细胞表面抗原染色方法标记 CD4 和 CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量（一般来说是 20μL，可能随批次有差异）。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。4℃ 孵育 30 分钟。 用预冷 PBS 溶液洗涤细胞，300-400 g 离心…
2018-12-06
如何计算细胞因子的活性单位值
细胞因子是有生物活性的蛋白，在文献中经常会看到细胞因子的工作浓度用units来表示，比如Human PDGF-BB的使用浓度是120 units/ml。 这时遇到的问题是我们的细胞因子 (如PeproTech的100-14B Human PDGF-BB)是以ug或mg来购买的，如何知道1 ug或1 mg的PDGF-BB中多少个活性单位，即units呢？ 要回答这个问题，我们首先要明确ED50的概念…
2018-11-07
手把手教你做免疫共沉淀实验
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。
2018-02-05
质粒提取常见问题及解决方法
质粒提取经常因操作不当引起提取的质粒不纯，或遇到各种问题，本文归纳了几个质粒提取过程中常见的问题及解决方法供大家参考。 Q1：涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死? 小科回答：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒干烧较长时间后，冷却后再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。 Q2：原先测序鉴定没有问题…
2017-08-25
