【视频】ELISA实验原理与常见问题分析
- ELISA 基本原理；
- ELISA 试剂盒选择指南；
- ELISA 操作注意事项及常见问题分析。
2020-05-27
ELISA实验操作干货继续，收藏！
师弟：师姐师兄把ELISA总结的干货全公开了！ 师妹：欧耶！结合上期的干货一起收藏吧。 Q：ELISA实验加完底物显色后，所有孔都无色，阳性对照也很弱，什么原因呢？ Q：ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因： 1、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出…
2020-04-10
细胞周期检测-知识点汇总
流式细胞术分析细胞周期的原理 在细胞周期的不同时期，DNA含量存在差异，用DNA染料进行染色（如应用最广泛的染料PI），DNA含量多，荧光强度高，DNA含量少，荧光强度低，因此可以根据DNA荧光强度的变化，来判断细胞处于哪个时期。 利用PI分析细胞周期，需要加入RNase消除RNA的影响 PI是通过插入双螺旋结构中叠加在一起的碱基对核酸进行染色的，并且它可以插入所有DNA和RNA的双链区，PI不是…
2020-01-19
Th细胞检测方案 - 技术要点汇总
Th检测一般操作步骤 人/小鼠/大鼠Th检测方案 人/大鼠Th1/Th2CD3/CD8/IFN-γ/IL-4小鼠Th1/Th2CD3/CD4/IFN-γ/IL-4 由上图可知，抗凝剂选择肝素钠或肝素锂，不影响Th细胞的活化和细胞因子的分泌。 非肝素抗凝血(如ETDA、枸橼酸钠抗凝血)，可通过淋巴细胞分离液处理后，再进行刺激/阻断，仍然可以检测到细胞因子，如下图：
2020-01-14
流式操作步骤：表面抗体染色
细胞样本 取100ul细胞悬液（细胞计数后用流式染色缓冲液 Flow Cytometry Staining Buffer调整浓度为1×107/mL） 加入适量的表面抗体，室温避光孵育15min（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书） 加入1~2ml流式染色缓冲液，300g离心5min弃上清 用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析如不能立即检测，用0.5ml 0.1~4%多聚…
2019-10-25
Th17 检测原理和样品处理方法
组分25T抗人 CD3, FITC (克隆号：OKT3)150 μl抗人 CD8α, PerCP-Cy5.5 (克隆号：RPA-T8)150 μl抗人 IL-17A, PE (克隆号：(64DEC17)150 μl佛波酯/离子霉素混合物 (250×)100 μl布雷非德菌素 A/莫能霉素混合物 (250×)100 μl固定破膜剂试剂…
2019-10-13
全血 Foxp3 实验操作步骤
1. 取 100ul 全血，按照细胞表面抗原染色方法标记 CD4 和 CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。4 ℃孵育 30分钟。 2. 用去离子水（不能用 PBS）将溶血素稀释成 1×。每管用量为 2ml。 3. 染色完的全血不用洗，加 2ml 稀释好的溶血素，迅速混匀，静置 8~10 分钟，观察溶液透亮后用预冷 PBS 溶液…
2018-12-10
人 Treg 试剂盒操作步骤
制备 PBMC，并调整细胞浓度至 107/mL。 在每个流式上样管中加入 100 μL 准备好的细胞悬液，细胞数约为 1 × 106 个。 按照细胞表面抗原染色方法标记 CD4 和 CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量（一般来说是 20μL，可能随批次有差异）。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。4℃ 孵育 30 分钟。 用预冷 PBS 溶液洗涤细胞，300-400 g 离心…
2018-12-06
