流式三要素之一|仪器篇

流式细胞术是一种对溶液中单个细胞或颗粒进行快速、多参数分析的技术。流式细胞仪利用激光作为光源,照射在细胞上,产生散射光和荧光信号,由检测器如光电二极管或光电倍增管读取。之后,这些信号被转换成电子信号,由计算机进行分析,并写入标准格式(.fcs)数据文件。另外,细胞群可以根据其荧光或散射光的特性进行分析或分选。 用于流式细胞术的仪器在过去的几十年里不断“进化”着,以满足越来越多的科研与临床应用需求。…

流式三要素之一|样本篇

做流式实验需要仪器、样本以及试剂,对于流式实验而言,样本质量的高低对最终的检测结果有很大的影响。进行流式实验的样本多为外周血、骨髓、各类体液(如脑脊液、胸水、腹水)以及人体的组织(如淋巴结、脾、肝等)。不同的样本处理方法不同,想要获得好的检测结果,样本的制备和保存很关键。 本文就为大家分享各种样本的详细处理方法。 1.外周血/骨髓 样本保存: 收集样本后置于加有抗凝剂(一般选择肝素或EDTA)的试…

蛇年第一课|小科带你回顾凋亡实验及其检测要点

细胞凋亡(apoptosis),属于细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD),是由基因控制的细胞自主、有序的死亡,在维持生物体内环境稳定方面发挥着重要作用。 细胞凋亡与疾病的关系 对于人而言,健康状况下,机体内细胞凋亡处于一个平衡状态。当细胞凋亡出现异常,就极易引发各种疾病。 细胞凋亡典型特征 从形态学角度观察细胞凋亡,其过程是多阶段的,首先是细胞体积缩小,连接消失,与…

流式细胞术—FAQ(二)

11. 为什么检测小鼠CD3ε而不是CD3? CD3是由多条肽链组成的复合体,包括CD3ε, CD3δ, CD3γ, 和CD3ζ。其中,CD3ε是最常用的标记,因为它在T细胞中相对特异性地表达,并且可以单独作为一个可靠的标志。相比于整个CD3复合体更具特异性,可以减少检测中的非特异性信号或交叉反应,提升检测的灵敏度和准确性。 12. CD8和CD8α的区别? CD8是一个复合体,由CD8α 和CD…

流式细胞术—FAQ(一)

1.流式染色条件是什么?   一般推荐室温染色15分钟;或4℃染色30分钟。具体请参照抗体说明书。 2.Th检测为什么要使用刺激阻断剂? 正常情况下,外周血中仅有极少量的Th1、Th2,IFN-γ、IL-4含量极少,无法检测到,需要刺激剂(PMA/Ionomycin Mixture)将Th细胞刺激分泌细胞因子,细胞因子产生后会被分泌到细胞外,无法进行检测。加入阻断剂 (BFA/Monensin M…

专利|一种检验凋亡试剂真假的专利

应用Annexin V检测细胞凋亡的亲们 还在为购买的试剂真假担忧吗? 在为凋亡阳性质控而烦恼吗? 补偿调节还顺利吗? 联科生物的发明专利了解一下 应用Annexin V法检测细胞凋亡通常是通过流式细胞仪。利用仪器激光激发荧光染料发出荧光,再通过检测器进行检测分析。但在进行多色分析时,由于不同荧光素的发射光谱之间存在互相重叠现象,需要进行补偿调节。补偿调节时,样本须同时包含阴性细胞群和阳性细胞群,…

流式实验中不可或缺的试剂—辅助试剂

对于辅助大家肯定不陌生,玩游戏的都知道,辅助在团队中的位置是必不可少的,一个优秀的辅助,可以在游戏中给你增加更多buff。 在实验中,有些试剂是被称为辅助试剂,下面给大家介绍下联科的流式辅助试剂。 01/红细胞裂解液(溶血剂) 利用低渗原理破碎血液或骨髓标本中的红细胞,氯化铵是红细胞裂解液的主要效应物质,氨根离子不能通过细胞膜,而其他离子可以通过,造成细胞内外的离子浓度差异,形成了渗透压差,外部的…

Accutase酶:凋亡检测最佳辅助

在体外培养黏附细胞时,常常需要消化分离细胞,消化分离的细胞后续进行细胞转染实验、细胞迁徙实验、细胞增殖实验、及分析检测(如流式细胞术),对于上述实验,大家通常使用蛋白酶进行消化分离细胞,然而这些酶(如胰酶)对细胞损伤比较厉害,而Accutase 是一种天然的酶,兼具蛋白水解酶和胶原酶的活性。但它比胰酶和胶原酶更有效,使用浓度更低,使之毒性更小、更温和,因此对细胞的损伤更小,可减少因消化处理带来的假…