流式仪器中的碘化丙啶（PI）清洗

  • Post category:生物资讯
  • Post views:5058 次访问

http://www.liankebio.com/article-information_Tech-2058.html

作者：佚名 发布日期：2017-07-28 09:00

流式仪器中的碘化丙啶（PI）清洗
在细胞周期检测或细胞死活鉴别中，经常会用到一些核酸染料，最常用的就是碘化丙啶（简称PI）。然而，PI用着方便、简单、便宜，但可能给管路清洗带来很大的麻烦，所以很多中心不愿意将机器给大家用来做细胞周期。另外，不仅仅是碘化丙啶，其它如7-AAD等核酸染料均存在粘附在液流系统中的风险。

但实际上，只要清洗得当，还是没关系的，大家无需过于担心。这里介绍一些国外FLOWER总结的清洗绝招，既有经验之谈，也有天马行空的脑洞。大家可根据需要选择一种试试，好好爱护我们娇贵的流式细胞仪器。
方法1： 先跑一会儿DMSO，然后再用蒸馏水冲洗
由于PI在DMSO中的溶解度较高，所以可以考虑用DMSO先冲洗液路，但是国外有流式战友试了之后效果不是特别理想。

另外一个选择就是先用DMSO跑5分钟，然后再用仪器厂家清洗液上仪器跑5分钟，最后再用蒸馏水跑5分钟。但结果似乎也不是特别理想。

方法2: 先跑乙醇，再用蒸馏水冲洗
利用乙醇溶解度高的原理，将残留的PI除去，但实测似乎效果也一般。

方法3 :用次氯酸钠
这是最传统常用的方法；用终浓度 0.1～0.5％的次氯酸钠溶液清洗。

对于特别粘冲的染料（例如AO、7-AAD等），有用户建议在步骤上增加70％乙醇，也就是说：

1、将终浓度0.1～0.5％的次氯酸钠溶液浸泡上样针，将支撑架打到一边，让上样针吸取1分钟，然后支撑架打回来，按照正常跑5分钟。

2、用70％乙醇，重复第一步步骤。

3、用蒸馏水，重复第一步步骤。

切记，每根管子跑完之后都要扔掉，不要重复使用。

除了常规的一些办法，还有一些比较另类的处理方式。

方法4 : PI喜欢DNA，那么就用DNA来解决
这个原理很有意思，就是利用PI容易与DNA结合的方式，用放置了很长时间的外周血样本，由于标本中的细胞基本上都碎了，所以白细胞释放出大量的DNA。新加坡的Te Chih推荐可以用这类标本上机，利用DNA结合残留的PI。

方法5: 咖啡因
这个Idea更有意思，实属天马行空，但却有文章实实在在的作为技术支撑。

大多数荧光染料通过静电可粘附在流式细胞仪液路上，从而对后续样品中的细胞产生影响。Bedner等人观察到，除了漂白水以外，也可以利用咖啡因溶液（例如以PBS配制的50mM咖啡因溶液）去除液路中或已被荧光染料污染的细胞中的粘附荧光素。 咖啡因对PI或吖啶染料有相当高的亲和力，并且可以用于从染色的细胞、染色的凝胶以及静电结合这些染料的细胞、玻璃或塑料表面去除这些异常粘附的染料。

参考文献：Bedner E, Du L, Traganos F, Darzynkiewicz Z. Caffeine dissociates complexes between DNA and intercalating dyes: application for bleaching fluorochrome-stained cells for their subsequent restaining and analysis by laser scanning cytometry. Cytometry. 2001 Jan 1;43(1):38-45. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11122483)

来源：Purdue MailList 2017-June 051858