线粒体荧光染料（Mito）

检测步骤

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检验方法

1）贴壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度，吸除培养液，加入 37℃预热的线粒体荧光染料。在所使用细胞正常培养条件下孵育 15-45 min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液，即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或者进行后续的固定和透化步骤。
2） 悬浮细胞的染色
离心收集细胞，吸除上清，利用 37℃预热的线粒体荧光染料轻轻重悬细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育 15-45 min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，离心收集细胞，利用 37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞，被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前先用多聚赖氨酸（poly-D-lysine）包被载玻片或盖玻片。或者进行后续的固定和透化步骤。

固定和透化

1） 染色结束后，利用培养液或缓冲液清洗细胞；
2） 小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含 2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。
3） 清洗细胞：吸除固定液，用适当缓冲液冲洗细胞数次。
4） 细胞透化（可选）：像 ICC 等实验需要细胞要做透化，则可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如 Triton X-100 的缓冲液中孵育。透化结束后，用缓冲液清洗细胞即可进行后续 ICC 实验。经检测，利用含 0.2% Triton X-100 的 PBS 孵育内皮细胞 10 min 可以达到良好的透化效果。另外，还可利用预冷的丙酮透化 5 min，之后用 PBS 清洗细胞。经验证，即使后继没有进一步的抗体标记，丙酮透化处理也可降低背景信号。

注意事项

1. 1）DMSO 有毒，使用时请小心操作。
2. 为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。
3. 更多相关产品敬请关注联科生物网站或来电咨询。