师姐不会告诉你的ELISA样品处理方法，看这个就够了……

小鼠心脏组织处理方法

● 提取缓冲液：100 mM PIPES (pH 7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制剂混合物（Sigma-Aldrich）

● 步骤：取左心室组织，在异戊烷中冷冻。将~10mg左心室组织于2–3 ml提取缓冲液中匀浆，然后在4℃下16000g离心30分钟。上清用于 ELISA法测定BDNF蛋白水平。单位pg /mg总蛋白。

● 参考文献：Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). "Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion." EBioMedicine 47: 384-401.

小鼠肝组织处理方法

● 提取缓冲液：RIPA缓冲液（50 mM Tris–HCl，150 mM氯化钠，1 mM EDTA，1%NP-40，1%脱氧胆酸钠，0.1%十二烷基硫酸钠），加蛋白酶抑制剂混合物（100×；Cell Signaling Technology，USA）

● 步骤：肝组织（50 mg）在提取缓冲液中匀浆。离心取上清，采用ELISA法检测了IL‐25, IL‐33, IL‐1β, MMP2, MMP9, 及TIMP1的含量。

● 参考文献：Loh, Z., R. L. Fitzsimmons, R. C. Reid, D. Ramnath, A. Clouston, P. K. Gupta, K. M. Irvine, E. E. Powell, K. Schroder, J. L. Stow, M. J. Sweet, D. P. Fairlie and A. Iyer (2019). "Inhibitors of class I histone deacetylases attenuate thioacetamide-induced liver fibrosis in mice by suppressing hepatic type 2 inflammation." Br J Pharmacol 176(19): 3775-3790.

小鼠脾脏肿瘤的制备方法

● 提取缓冲液：50 mM磷酸钾，pH 7.1，0.1 M NaCl，2 mM EDTA，0.4 mM phenylmethylsulfonyl fluoride，60 μg/mL soybean trypsin inhibitor，2 μg/mL leupeptin，2 μg/mL aprotinin，2 μg/mL pepstatine

● 步骤：切除脾脏肿瘤组织，立即在液氮中冷冻并在-70 °C下储存。冷冻组织在冰浴预冷提取缓冲液中化冻。冰浴，撕裂组织。然后4℃下，超声处理。4℃下以100000 × g离心15分钟去除碎片，所得上清再次在4℃下以100000 × g离心30分钟。上清液含有胞浆蛋白，颗粒包含膜部分。

● 参考文献：Yao, M., S, Kargman, E.C. Lam, C.R. Kelly, Y.X. Zheng, P. Luk, E. Kwong, J.F. Evans and M.M. Wolfe (2003) Inhibition of cyclooxygenase-2 by rofecoxib attenuates the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice. Cancer Research 63(3):586-592.

小鼠肺组织处理方法

● 提取缓冲液：1×磷酸盐缓冲液（PBS）

● 步骤：左肺在1×磷酸盐缓冲盐水中机械破坏，经过4次冷冻/解冻循环以打破细胞膜，然后4℃下，5000g，离心5分钟，回收上清用于ELISA法测定Ang II 浓度。

● 参考文献：Gonzalez-Tajuelo, R., M. de la Fuente-Fernandez, D. Morales-Cano, A. Munoz-Callejas, E. Gonzalez-Sanchez, J. Silvan, J. M. Serrador, S. Cadenas, B. Barreira, M. Espartero-Santos, C. Gamallo, E. F. Vicente-Rabaneda, S. Castaneda, F. Perez-Vizcaino, A. Cogolludo, L. J. Jimenez-Borreguero and A. Urzainqui (2020). "Spontaneous Pulmonary Hypertension Associated With Systemic Sclerosis in P-Selectin Glycoprotein Ligand 1-Deficient Mice." Arthritis Rheumatol 72(3): 477-487.

小鼠肾脏组织处理方法

● 提取缓冲液：0.1 M Tris-HCl （pH 7.4）

● 步骤：将0.5 g肾组织与5 ml 提取缓冲液混合。用机械搅拌器搅拌均质。匀浆离心15分钟（5000g）两次。取上清用ELISA法测TNF-α和IL-1β浓度。

● 参考文献：Jaremek, M., Nieradko-Iwanicka, B (2020). " The effect of subacute poisoning with fenpropathrin on mice kidney function and the level of interleukin 1 beta and tumor necrosis factor alpha" MOLECULAR BIOLOGY REPORTS 47(6):4861-4865.

小鼠脑组织处理方法(一)

● 提取缓冲液：0.9%生理盐水

● 步骤：麻醉小鼠，取脑组织。按每200 mg加1 ml的量加0.9%生理盐水，机械研磨，匀浆在4℃下以12000 rpm离心10 min。取上清用于ELISA法检测IL-1β, IL-6, 及TNF-α的含量。

● 参考文献：Lai, N., D. Wu, T. Liang, P. Pan, G. Yuan, X. Li, H. Li, H. Shen, Z. Wang and G. Chen (2020). "Systemic exosomal miR-193b-3p delivery attenuates neuroinflammation in early brain injury after subarachnoid hemorrhage in mice." J Neuroinflammation 17(1): 74.

小鼠脑组织处理方法(二)

● 提取缓冲液：100 mM PIPES (pH7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制剂混合物（Sigma-Aldrich）

● 步骤：取海马组织，在异戊烷中冷冻。将整个海马体于2–3ml提取溶解缓冲液中匀浆，然后在4℃下16000g离心30分钟。上清用于 ELISA法测定BDNF蛋白水平。单位pg /mg总蛋白。

● 参考文献：Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). "Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion." EBioMedicine 47: 384-401.

小鼠脑组织处理方法(三)

● 提取缓冲液：PBS含有蛋白酶抑制剂混合物

● 步骤：处死动物并取头部。解剖获取脑区（海马体和皮质）。并用2-甲基丁烷在干冰上快速冷冻。将大脑样本置于含有蛋白酶抑制剂混合物的无菌PBS中，均质。4°C，11000 rpm，离心20分钟。取上清备用。

● 参考文献：Lee, J., S.L. Chan, and M P. Mattson (2002) Adverse effect of a presenilin-1 mutation in microglia results in enhanced nitric oxide and inflammatory cytokine responses to immune challenge in the brain. Neuromolecular Medicine 2(1):29-45.

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