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肝肿瘤（Hepatocellular carcinoma, HCC）是世界范围内一种常见的恶性肿瘤，也是我国第四大恶性肿瘤。该病的早期患者在经过适当治疗后，5年存活率在在60% - 80%之间。然而，对于一些晚期患者而言，手术或者局部治疗是不够的，需要全身治疗。由于肝癌对化疗的反应程度较低，靶向治疗可能是一个更好的选择，但耐药性仍然是一个大问题。
索拉非尼（sorafenib）是多种激酶的抑制剂，包括VEGFR1、2和3、PDGFRβ、c-Kit和RET2，靶向血管生成和肿瘤发生途径。索拉非尼作为HCC的首个靶向治疗药物，在临床应用已超过10年。尽管其疗效显著，但在初期治疗后很快出现耐药性，其机制仍不清楚。研究表明，microRNAs (miRNAs)可能在这种耐药性中扮演着重要角色。
近日，浙江大学医学院附属邵逸夫医院团队在期刊Cell Death & Disease上发表了题为miR-486-3p mediates hepatocellular carcinoma sorafenib resistance by targeting FGFR4 and EGFR的研究论文。
这项研究表明，miR-486-3p通过调节FGFR4和EGFR的表达，影响肿瘤细胞对索拉非尼的耐药性。这可能会为索拉非尼联合治疗HCC提供了潜在的治疗靶点。
研究方法及结果
1.初步探索肝肿瘤细胞对索拉非尼耐药性的机制
研究团队建立了3种具有索拉非尼耐药性的细胞株，即SK-Hep- SR, HepG2-SR以及Huh7-SR。3种耐药细胞株在索拉非尼环境下的细胞活力均高于亲本细胞（图1-1）。
选取耐药细胞株Huh7-SR及其亲本细胞株Huh7-WT进行miRNA测序分析，以鉴定可能参与耐药性发展过程的候选miRNA。结果表明，两组之间有26种miRNA存在表达差异（图1-2）。其中，Huh7-SR细胞中miR-671-3p、miR-378a-5p、miR-328-3p、miR-486-3p和miR-378a-3p的5种miRNA显著降低（图1-3）。在另外两种耐药细胞株中也存在相同情况。
为了确定这些miRNA的生物学功能，研究团队用miRNA模拟物转染3种肝癌耐药细胞株，并分别分析了它们对索拉非尼的反应。CCK8实验表明，miR-486-3p模拟物可以一致地增强3种耐药细胞株对索拉非尼的敏感性（图1-4）。
在肝癌数据库中，miR-486-3p水平较高的患者总生存期和无病生存期均较好，而低水平的miR- 486-3p可能与较差的治疗反应有关。
研究团队进一步检测了40例患者的样本中miR-486-3p的水平，发现肿瘤组织中miR-486-3p水平低于相邻正常组织，这说明miR-486-3p在肿瘤发生中也具有重要作用（图1-5）。
实验的结果表明，miR-486-3p与肝肿瘤细胞的耐药性有重要关系。
2. miR-486-3p可以使肝肿瘤细胞对索拉非尼的敏感性增强
研究团队通过体外实验，发现通过转染提高miR-486-3p水平可以诱导肝肿瘤细胞的凋亡，通过FACS分析（图2-1）、细胞形态学改变（图2-2）和TUNEL分析（图2-3）可观察到这一点。
实验表明，miR-486-3p可诱导耐药肝肿瘤细胞凋亡，而降低其表达水平可增强细胞对索拉非尼的耐药性。
3. miR-486-3p通过靶向FGFR4和EGFR参与索拉非尼耐药
为了研究miR-486-3p影响肝肿瘤细胞对索拉非尼耐药性详细的分子机制，研究团队利用MiRWALK2.0预测了miR-486-3p的潜在靶点并进行分析。结果显示，FGFR4基因与EGFR基因在索拉非尼耐药肝肿瘤细胞中的mRNA、蛋白表达水平均显著升高（图3-1）。提高miR-486-3p则能够降低二者的表达水平（图3-2）。
通过实验研究团队证明miR-486-3p主要通过靶向FGFR4和EGFR来影响肝肿瘤细胞对索拉非尼的耐药性。
通过后续的实验研究团队在体内和体外均证明了miR-486-3p通过靶向FGFR4基因和EGFR基因的3’UTR来抑制其编码蛋白的表达，并诱导索拉非尼耐药肝肿瘤细胞的凋亡。
本研究发现miR-486-3p是一种关键的索拉非尼耐药介质，其通过调控FGFR4和EGFR的表达来影响肝肿瘤细胞对索拉非尼的耐药性。本研究也为HCC治疗提供了一个潜在的靶点。
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