联科生物NP-40裂解液配方

本产品已添加 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA 和 leupeptin等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。如需添加 PM SF，请在临用前加入。
一、 使用方法对于培养细胞样品：
1. 融解 NP-40 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后，细胞就会被裂解。

3.对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，须分装成50 - 100万细胞/管，然后再裂解。

4.裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大，裂解液的用量到200 μl或250μl。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解 NP-40 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000 - 14000 g离心3 - 5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
二、注意事项
1. 为达到最佳的裂解效果，尽量避免过多的反复冻融。可适当分装后使用。

2. 需自备PMSF。PMSF (WB018或WB0181) 可向联科订购。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或2 - 8℃进行。

4. 为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。
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