Life Technologies免疫荧光辅助产品

免疫荧光步骤及辅助产品：

一、Image-iT 固定/透化试剂盒(R37602)

固定/透化试剂盒Image-iT Fixation/Permeabilization Kit (R37602)包含固定液、通透液、洗液和封闭液四种组分，处理后可立即进行免疫染色。

产品特点：

⇒ 全套1x即用型试剂盒 ，可固定、透化并洗涤细胞

⇒ 操作步骤贴在内盖上

⇒ 无需制备新鲜的固定剂

⇒ 室温保存(18个月)

⇒ 优化的配方有助于减少背景染色，提高图像的质量

⇒ 适用于荧光蛋白、染料、抗体和Click-iT 试剂产品列表：

二、Image-iT FX 信号增强剂(I36933)

在荧光染色前，可将Image-iT? FX 信号增强剂用于固定细胞或组织的玻片上，抑制荧光基团与细胞中的成分发生相互作用，大幅降低非特异性荧光背景。而通常的封闭液如血清或BSA不起作用。

上图 Image-iT FX signal enhancer可增强标记特异性和分辨率。固定破膜的牛肺动脉内皮细胞经Image-iT FX signal enhancer处理(左)或不处理(右)，随后标记tetramethylrhodamine streptavidin。

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三、NucBlue 固定细胞染料(R37606)

DAPI是经典的用于固定细胞的核酸染料，与DNA结合后发出蓝色荧光。Life Technologies的NucBlue Fixed Cell ReadyProbes

Reagent具有如下特点： ⇒ 即开即用、高纯度的DAPI液体 ⇒ 无需稀释、称重或移液 ⇒ 方便的滴管瓶 ⇒ 室温保存右图 人皮肤成纤维细胞(HDF)经Image-iT Fixation/Permeabilization Kit固定破膜后，加入2滴/ml的NucBlue? Fixed Cell染料进行染色。

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四、抗淬灭剂

不可逆的光漂白引起的荧光损失会导致灵敏度显著降低，尤其是靶分子含量较低或受到激发光高强度或长时间照射时。为了使光漂白的影响最小化，Life Technologies开发了一系列抗淬灭剂，增强各种常见荧光素的光稳定性。

1.Prolong Gold抗淬灭剂系列

⇒ 可见光全光谱保护

⇒ 过夜固化，保存数月

⇒ 与其他抗体或染料兼容

上图 经固定的牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)标记抗α-tublin抗体和FITC-goat anti-mouse IgG。样本经ProLong Gold antifade reagent (P36930，上排)或PBS(下排)处理。图像为每隔5秒的荧光成像。

2.SlowFade Gold抗淬灭剂系列

⇒ 可见光全光谱保护

⇒ 直接观察，保存几天至几周

⇒ 与其他抗体或染料兼容

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五、活细胞成像溶液(A14291DJ)

活细胞成像溶液是一种生理培养基，广泛用于基于细胞的研究。

⇒ 通用性 – 适用于活细胞成像、染料染色和洗涤步骤

⇒ 经过优化的生理缓冲液 – 适于活细胞应用

⇒ 荧光背景清楚 – 背景极低、信噪比更佳，可实现更高效的活细胞成像

⇒ 与培养基相比，缓冲能力更强 – 可提高细胞活性产品列表

六、BackDrop 背景抑制剂(R37603)

BackDrop Background Suppressor ReadyProbes Reagent是一种新型试剂，可用于有效抑制活细胞成像样品中的背景荧光。

⇒ 避免了去除培养基的需要和潜在的细胞损失

⇒ 室温稳定，直接从滴管瓶中添加

⇒ 可置于实验台上，方便取用

⇒ 蓝、绿和红三种荧光用试剂，单独或混合使用背景抑制剂

⇒ 增加信噪比，提高图像质量和检测灵敏度

上图 BPAE细胞培养于含20% FBS的DMEM中，加(+)或不加(-)BackDrop Background Suppressor的比较。

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七、NucBlue 活细胞染料(R37605)

Hoechst 33342是常用的可通透细胞的核酸染料，与DNA结合后可发出蓝光。

⇒ 即开即用、高纯度的Hoechst 33342液体⇒ 无需稀释、称重或移液 ⇒ 方便的滴管瓶 ⇒ 室温保存图5 新生儿表皮角质细胞(HEKn)接种于细胞培养皿再染色NucBlue Live Cell染料。

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