life细胞活性和细胞毒性检测试剂盒

? 细胞活性和细胞毒性

? 细胞增殖和细胞周期

? 细胞凋亡

? 自噬

? 氧化应激

? 内吞作用和吞噬作用

? 细胞内离子

本文为大家介绍细胞活性和毒性的产品

细胞活性和细胞毒性的荧光分析可与荧光显微镜、荧光计、荧光酶标仪或流式细胞仪配合使用，操作方便，与传统的比色法和放射性分析相比具有诸多优势。Life Technologies的细胞活性和细胞毒性分析试剂及试剂盒主要用于测定细胞群中活细胞和死细胞的比例。

一、LIVE/DEAD®细胞活性/毒性试剂盒

LIVE/DEAD®细胞活性/毒性试剂盒提供了一种极其简单的基于荧光的分析方法，可用于测定贴壁或非贴壁细胞的活性以及细胞毒性。LIVE/DEAD® 分析专门采用两种单独的荧光探针区分活细胞与死细胞，Life Technologies开发出多种颜色的试剂盒，可用于流式细胞术、显微镜或微孔板检测。

产品特点：

操作简单——加样、孵育并分析；无需清洗步骤

功能多样——适用于贴壁细胞、非贴壁细胞及特定的组织

易于分析——通过不同的荧光可轻易地区分死/活细胞

1.适用于哺乳动物细胞的LIVE/DEAD®试剂盒

哺乳动物细胞LIVE/DEAD®试剂盒与荧光试剂结合使用，可通过两色区分活细胞群与死细胞群，且无需冲洗步骤。是高通量筛选、成像、荧光分析和流式细胞术的理想选择。

图1. 活的以及经乙醇处死的牛肺上皮细胞混合物经LIVE/DEAD®Viability / ytotoxicity Kit(L3224)染色。活细胞显示绿色荧光，而死细胞则显橘红色。

图2. LIVE/DEAD® Sperm Viability Kit (L7011)染色精子。具有完整细胞膜的活精子被标记可透膜的核酸染料SYBR®14，显示绿色荧光。死亡的精子则被PI标记，显示橘红色。

图3. Jurkat细胞加入10 μm喜树碱诱导，于37℃、5℃孵育4h后，经LIVE/DEAD®Cell Vitality Assay Kit(L34951)染色。根据SYTOX绿色荧光和resorufin荧光强度可将细胞分为活细胞、受损细胞和死细胞三群。

2.适用于细菌的试剂盒

LIVE/DEAD® BacLight™细菌活性试剂盒提供了两种不同的核酸染料，可将质膜完整的活细菌(绿色荧光)与质膜不完整的死细菌(红色荧光)快速区分开来。

图4.使用LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit (L7007, L7012, L13152)鉴定酿脓链球菌上存活的和死亡的细菌。	图5.使用LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability and Counting Kit (L34856)分析细菌培养物。活的和死亡的金黄色葡萄球菌(A和C)和大肠杆菌(B和D)经试剂盒染色后进行流式分析。使用绿色或红色荧光与SSC(A和B)区分出细菌和微球。通过红色和绿色荧光可区分出活细胞和死细胞(C和D)

3.适合酵母和真菌的试剂盒

LIVE/DEAD®酵母存活试剂盒提供了一种极为简单灵敏的分析方法，可用于区分复杂的混合物或不纯的培养物中的活酵母和真菌。

LIVE/DEAD® Yeast Viability Kit采用新的双色荧光探针检测酵母细胞的活性。在具有完整浆膜和代谢功能的酵母中，FUN 1可由黄绿色的胞内荧光转变为橘红色的空泡内荧光，而无论代谢状态如何，Calcofluor White M2R都会与细胞壁结合，产生蓝色荧光。

LIVE/DEAD® FungaLight™ Yeast Viability Kit则通过流式快速准确地鉴定死/活酵母细胞。绿色荧光的SYTO 9可与所有酵母细胞结合，而PI则只能进入细胞膜受损的酵母中，并降低SYTO 9的荧光，从而区分死细胞(红色荧光)和活细胞(绿色荧光)。

图6. 使用LIVE/DEAD® Yeast Viability Kit (L7009)染色酿酒酵母，FUN 1在空泡内的产生红色荧光，而Calcofluor White M2R结合在细胞壁上发出蓝色荧光。

图7. 使用 LIVE/DEAD® FungaLight™ Yeast Viability Kit (L34952)染色酵母。

A为根据FSC/SSC排除碎片，选择的酵母群设门。B为R1门中的酵母根据红色荧光和绿色荧光区分死细胞和活细胞

4.可固定死细胞染色试剂盒

LIVE/DEAD® 可固定死亡细胞染色试剂盒采用了一种能与胺基起反应的荧光染料，通过流式细胞仪来测定哺乳动物细胞的活力。对于细胞膜受损的细胞，染料可与细胞内部及细胞表面的自由胺基相互作用而发出强烈的荧光。而对于活细胞，染料只能与细胞表面胺基相互作用，因而荧光强度较低。活细胞与死细胞荧光强度差别通常大于50倍，这一荧光强度的差别在甲醛固定后仍可完全保留下来。Life Techonlogies提供多种单一颜色的检测试剂盒以及多色检测试剂盒可供选择。

产品特点：

保存时间长——染料为冻干粉，稳定

染色稳定——固定后保持原有染色类型，不会降低灵敏度

信号强——在单通道中能够轻易区分活/死细胞，可兼容多色分析

图8. 使用LIVE/DEAD® Fixable Violet Dead Cell Stain Kit(L34955)进行活细胞设门，排除假阳性。以散射光设门活细胞(A)会带入许多死细胞，造成染色的假阳性(C)；而用LIVE/DEAD® Fixable Violet染料设门活细胞(B)可消除死细胞带来的假阳性(D)。

二、死细胞SYTOX®染料

SYTOX®染料为细胞非通透性的核酸染料，可以非常轻易地渗入质膜受损的真核细胞及革兰阳性和革兰阴性细菌内，但不会进入活细胞。由于它们无法穿过完整的细胞膜，与双链 DNA 结合而增加荧光强度，因此是最佳的死细胞染料。SYTOX® 死细胞染料易于使用，只需将其加入细胞并观察即可，它在水溶性培养基中不发出荧光，因此无需额外的清洗步骤。这些染料适用于多种平台，包括荧光显微镜、流式细胞仪和微孔板检测。

产品特点：

准确：高亲和核酸染料，可轻松鉴定死细胞

灵活：多种颜色，光谱重叠极少，具有更佳的多色性能

简便：无需清洗步骤；只需加入、孵育并分析即可

可固定：固定后可维持染色形态，适用于胞内表型的简单活细胞、死细胞分析

图9. HeLa细胞经固定、破膜和RNA酶处理后，标记mouse anti-human Golgin-97 monoclonal antibody (A21270)和黄色荧光的Alexa Fluor® 430 goat anti-mouse IgG antibody (A11063)，F-actin以红色荧光的Alexa Fluor® 594 phalloidin (A12381)标记，细胞核以SYTOX® Green nucleic acid stain (S7020)标记	图10. 未处理的和热处死的Jurkat细胞混合物经SYTOX® Blue Nucleic Acid Stain (S11348)染色5分钟后，在配置405nm紫光激发光的流式仪上进行检测。活细胞和死细胞可轻松地区分开。