叮！联科向您投递了个ELISA实验操作干货包，请查收~

包裹一 样本如何处理、收集、保存？

1.细胞培养上清

细胞培养液在2500rpm/min 离心20分钟后，收集上清即刻检测， 或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

2．血清样本

分离管分离血清。在1000g离心之前，使血样凝集30分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

3. 血浆样本

EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集3分钟内离心收集样本。即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。注：不要使用严重溶血或高血脂的样本。所有样本收集后，应及时分装并贮存于-20℃。如果在24小时内检测，样本可以存放在2 - 8℃。避免样本的反复冻融。在分析前，冷冻样本应该缓慢的恢复至室温，轻柔地混匀。检测前，样本中可见的沉淀必须去除。

包裹二 已设阴性对照，还需空白对照吗？

首先要清楚空白对照和阴性的区别：

空白对照：仅用稀释液代替检测样本，用以观察最终反应的显色“本底”，并用于酶标仪消除、扣除“本底”，即以本底为“零’，读取阳性、阴性对照孔和样本孔的吸光值；

阴性对照：是本实验检测与待检物有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素之间的差异。

包裹三 出现白板，什么原因呢？

如果显色完成后，肉眼可见整板没有显示反应，可能原因及应对方法详见下表。

包裹四 出现花板，什么原因呢？

花板是指空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的吸光度（OD 值）却明显偏高，可能原因及应对方法详见下表。

包裹五 标曲不佳，什么原因呢？

ELISA 实验中标准品进行了倍比稀释，但标准曲线最高点 OD 值偏高或偏低，且没有梯度，可能原因及应对方法详见下表。当然，也会存在酶标板封闭不足、本底不稳定的情况。

包裹六 标曲正常，样本吸光值极低，什么原因？

ELISA 实验中标准品进行了倍比稀释，但标准曲线最高点 OD 值偏高或偏低，且没有梯度，可能原因及应对方法详见下表。当然，也会存在酶标板封闭不足、本底不稳定的情况。

此外，如果肉眼观察酶标板显色正常，而上机所测 OD 异常，可检测酶标仪参数的设定以及滤光片是否匹配。洗涤液多为非离子型中性缓冲液，既含有亲水集团，也含有疏水基团，可以使吸附在酶标板上的蛋白解离而溶于水中，去除非特异性吸附物质，但是浓度太高时，会引起包被抗体脱落。所以需要正确稀释。同时应该用高质量的纯净水稀释，不能引入别的离子，以免对抗原抗体结合和酶促反应产生影响。