你了解细胞凋亡及其检测的要点吗？

细胞凋亡（apoptosis）：属于细胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD），是由基因控制的细胞自主、有序的死亡，在维持生物体内环境稳定方面发挥着重要作用。蝌蚪发育成青蛙的过程中，尾的消失就是生物学中典型的细胞凋亡现象。

细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生物学意义及复杂的分子机制。细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程。

细胞凋亡典型特征

从形态学角度观察细胞凋亡，其过程是多阶段的，首先是细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离；然后是细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆；核质浓缩，核膜核仁破碎；胞膜有小泡状形成，膜内侧磷脂酰丝氨酸翻到膜外表面；Caspase活化，DNA降解成为约180bp-200bp片段；最终可将凋亡细胞遗骸分割包裹为几个凋亡小体，无内容物外溢，因此不引起周围的炎症反应。凋亡小体可迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。

早期事件： · 磷脂酰丝氨酸外翻 · 线粒体受损 · 细胞色素C释放内容	中期事件： · Caspase活化	晚期事件： · DNA片段化 · 凋亡小体形成

细胞凋亡与疾病的关系

对于人而言，健康状况下，机体内细胞凋亡处于一个平衡状态。当细胞凋亡出现异常，就极易引发各种疾病。

凋亡过多

凋亡不足

Annexin V检测凋亡七大要点

1．接种——对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡。

2. 收集——上清及铁壁细胞全部收集

部分凋亡细胞可能悬浮于培养上清中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。

3. 消化——选用Accutase酶

选用Accutase酶替代普通胰酶。Accutase酶已经在多种细胞系中得到验证，其消化更温和，可有效避免因消化过度使细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻，造成假阳性。（对凋亡不明显的实验强烈推荐）

4. 补偿调节——阳性质控

没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？联科生物凋亡试剂盒配备阳性质控液，补偿调节so easy！

5. 电压——足够大

大到快要超出边界。

6. 补偿——横平竖直

3、4象限横平；2、4象限竖直。

7. 漂亮结果——黄金分割（三分原则）