Western样品制备方法简介

向收集到的细胞中加入RIPA裂解缓冲液（蛋白酶抑制剂在使用前加入，终浓度为2ug/ml）在冰上裂解30-60min，然后再插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为宜，超声每次2-3s，重复3或4次，12000g离心3-5min，吸取上清备用。

2、 组织抗原的处理方法

将组织从动物体内取出（样品不宜反复冻融），取少量（1-2g）放入玻璃匀浆器中研磨成匀浆，然后转入微量离心管中进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次5-7s，重复5或6次，再12000r/min，离心3-5min，吸取上清备用。

上述两种方法得来的样品处理液还要加入1/4体积左右的电泳上样缓冲液，然后放在沸水浴中加热3-4min使蛋白质变性，方可作为样品准备行凝胶电泳。

二、其他样品的制备
细菌抗原、分泌上清样品、经抽提纯化的蛋白质样品可以直接加入电泳上样缓冲液，然后在沸水浴中加热3-4min使蛋白质变性。

Western样品制备必备品