Western Blot 一抗二抗去除液（酸性）使用说明

Post published:2015-07-21
Post category:生物资讯
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作者：联科生物发布日期：2015-07-21 12:00

ECL 化学发光法是目前最常用、最灵敏的 Western Blot 检测方法。由于这些底物不会在膜表面沉淀、牢牢结合在膜上，因此可以通过一抗二抗去除液(Stripping buffer)将亲和结合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足够强烈而有效解离结合的抗体，也要足够温和使转移的目标蛋白仍能完整地留在 NC 膜或 PVDF 膜上。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一次 SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。
一、使用方法
1. 用本产品覆盖经 ECL 发光的膜，室温孵育 5 - 10 分钟。

2. 弃去去除液，再加入新鲜的去除液覆盖经ECL发光的膜，室温孵育5 - 10分钟。

3. 弃去去除液，用 PBS 洗涤 10 分钟两次。

4. TBST洗涤5分钟。可用于接下来的封闭、孵育。
二、注意事项
1. 如使用辣根过氧化物酶(HRP)，封闭时应当使用脱脂奶粉或BSA，如使用碱性磷酸酯酶，封闭时应当使用酪蛋白。

2. 为取得最佳效果，推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。

3. 本产品适用于使用ECL或类似的化学发光试剂进行的Western Blot检测。使用非化学发光试剂进行的Western Blot检测，例如DAB、NBT/BCIP等，则不适用于本产品。

4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。

5. 对于特定的抗原和抗体，很难说哪一种Western Blot一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时，可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间，同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液，以摸索出最佳的适合您实验条件的Western Blot一抗二抗去除液。

6. 为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。
三、产品信息