人全血Treg检测

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作者:联科生物 发布日期:2019-10-17 08:00

【 操 作 步 骤 】1、取 100ul 全血,按照细胞表面抗原染色方法标记 CD4 和 CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量(联科流式抗体用量一般是5ul)。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。室温避光孵育15分钟。2、用蒸馏水(不能用 PBS)将红细胞裂解液(10×)稀释成1×工作液。每管用量为 2ml。3、染色完的全血不用洗,加2ml稀释好的红细胞裂解液,迅速混匀,室温避光孵育15分钟,观察溶液透亮后用预冷 PBS 溶液洗涤细胞,300 -400g离心5分钟,去上清。4、将Fixation/Permeabilization Concentrate和Fixation/Permeabilization Diluent按1:3比例制备成1×工作液(Cat# IC001组分,联科生物)。在流式管中染色,每个样本需要1ml。保存勿超过1天。5、旋涡震荡重悬细胞后加入1ml 1×Fixation/Permeabilization 工作液,并再次旋涡混匀。室温避光孵育 30 - 60 分钟。6、用蒸馏水将10×Permeabilization Buffer 稀释为1×工作液。在流式管中染色,每个样本需要8.5ml。剩余溶液在 2 - 8℃最多保存 1 周。7、无需洗涤,每管加入 2 ml 1× Permeabilization Buffer(Cat# IC001组分,联科生物)。室温下 300 - 400 × g 离心 5 分钟,弃去上清。8、(可选)重复上一步操作洗涤细胞。9、加入100 ul 1× Permeabilization Buffer PBS 重悬细胞。10、(封闭可选)加入大鼠血清 2 ul,室温避光孵育 15 分钟。11、加入适量的 Foxp3 抗体,对照管中加入适量的同型对照,具体用量参照说明书(联科流式抗体用量一般是5ul),室温避光孵育至少 30 分钟。12、加入 2ml 1×Permeabilization Buffer,室温下300 - 400 ×g离心5分钟,弃去上清。13、重复上一步操作洗涤细胞。14、用适量体积的 Flow Cytometry Staining Buffer 重悬细胞,并上机检测并分析。注:由于染色过程中使用了细胞固定和破膜,对比起活细胞在形态上会有一定变化,因此FSC/SSC 图中圈门时需要做一定调整。 以上说明书仅供参考,具体实验请对照厂商说明书操作。【 相 关 产 品 】

供应商 产品名称 货号 规格
MultiSciences 抗人 CD4, FITC (克隆号:RPA-T4) AH00401 20/50/100T
MultiSciences 抗人 CD25, APC (克隆号:BC96) AH02505 20/50/100T
MultiSciences 抗人 FoxP3, PE (克隆号:PCH101) AH0F04 20/50/100T
MultiSciences 大鼠 IgG2a 同型对照, PE CRG2a04 10/20/50μg
MultiSciences 小鼠 IgG1 同型对照, FITC CMG101 10/20/50μg
MultiSciences 小鼠 IgG1 同型对照, APC CMG105 10/20/50μg
MultiSciences FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Kit IC001 100T
MultiSciences 正常大鼠血清 NRS500 500μl
MultiSciences 红细胞裂解液(不含固定剂)(10×) LYS 100/250/500T
MultiSciences 流式染色缓冲液 S1001 125 mL
MultiSciences 4% 多聚甲醛 F0001 100ml
Thermo Fisher 补偿调节微球 01-1111-41 25 tests