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ELISA显色判断
如何控制标曲显色？(仅针对双抗夹心法ELISA试剂盒)
5 - 30分钟显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间：
方法一
肉眼观察：标曲S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止；
方法二
仪器判断：630 nm左右波长下，标曲S1孔的OD值达到0.5 - 0.7、S5孔的OD值达到0.05 - 0.08、Blank孔的OD值小于0.05时，即可终止；
注：高敏系列试剂盒因灵敏度更高，需严格控制显色时长，可较普通试剂盒适当缩短显色时间。
ELISA数据分析
分析软件：ELISACalc（联科客户如有需要此软件，可联系工作人员发送安装包）
步骤如下：
1.标曲和样本孔每个孔OD450值减去OD630或OD570值；
2.再将获得的标曲和样本孔数据分别减去空白孔，再进行下面的分析：
①拟合标曲（选择R2值大于0.99的比较好的拟合方式，必要时可以删除个别差异较大的标曲点进行拟合，直线或曲线拟合都可以）
②计算样本值，将样本减去空白孔的OD值复制，选软件中的“粘贴”，得到的X值再乘以相应的稀释倍数就是最终的浓度值
ELISA标准曲线拟合方程
1.直线回归：
- 直线回归是最基本、简单的回归分析方法，将所有的测试点拟合为一条直线，其拟合函数方程式为：y = a + bx。
- 一般实际实验中线性极好的情况下直线回归可以获得较为理想的R2值，如果直线拟合不理想，可以考虑三次曲线、logistic曲线（四参数）等。
2.logistic曲线（四参数）拟合回归方程：
- 竞争法和双抗夹心法都可以用到。
- 要求X值不能小于0（因为指数是实数，故有此要求）。
- 在很多情况下它都可以拟合ELISA的反应曲线，所以它也成了ELISA中应用最广的模型之一。
注：曲线拟合方法虽多，要根据不同类型ELISA本身的特点，选择最适合的曲线拟合模型，才能得到最合理的实验结果。一般情况下，需要综合考虑标准曲线的趋势走向以及R2值的大小以及样本落值情况。
