ELISA实验结果常见问题——背景深，怎么破？

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作者：联科生物 发布日期：2017-01-18 09:00

ELISA实验结果常见问题——背景深，整板有颜色，怎么破？
ELISA实验灵敏度高，特异性强，仪器单一，在生物科研上得到了广泛的认可。但在实验中，若不注意实验操作过程中的各个环节，可能会对最终实验结果产生比较大的影响，比如显色弱灵敏度低、背景高、白板等现象。联科生物对以上实验现象进行一一解析及解决方案。这章节讨论背景深（通常ELISA背景OD值<0.2），整板有颜色，可能的原因及解决方法：
序号 可能原因 解决方法
1 ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的ELISA板。
2 没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间。
3 不正确的孵育时间， 温度（尤其是底物孵育的时间） 最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。 完全按照说明书要求。
4 偶联抗体（streptavidin-HRP） 浓度过高 按照说明书调整到最佳的浓度。
5 洗涤不充分，洗后未拍干， 样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶 拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。
6 底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置。
7 样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置。
8 吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底 吸头尽可能一次性使用。
9 样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。

综上所述：在ELISA实验中应注意以下问题：

? 在实验前应该按相关要求将实验试剂平衡至室温；

? 样本不要溶血，不要反复冻融；

? 各试剂在使用前应充分混匀，以保证试剂的均一性和准确性；

? 严格控制反应温度和反应试剂；

? 相关浓缩液应按说明书要求稀释到相应比例方可使用；

? 洗板次数，洗板液的量，洗板液浸泡时间的长短，按说明书操作；

? 在终止反应时尽量避免微孔中存有气泡；

? 终止反应完成后应该在2min内完成酶标仪读数。