可固定的死活细胞鉴定染料 eBoscience

⇒ 死细胞的非特异性染色

⇒ 细胞的背景增高，影响检测的灵敏度例

⇒ 死细胞染色影响正确的结果比例

与传统染料PI、7-AAD相比有何优势？

⇒ 适用于胞内染色的死活细胞鉴定—— 固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色，而PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行，不能洗涤即要上机检测；对于胞内抗体的染色，由于经过了固定步骤，经过PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性，所以他们只适合于胞膜染色的死活细胞鉴定

⇒ Fixable Viability Dye的光谱多样，适合各种染色组合的搭配

	Fixable Viability Dye eFluor® 450
	Fixable Viability Dye eFluor® 506
	Fixable Viability Dye eFluor® 660
	Fixable Viability Dye eFluor® 780

eBioscience Fixable Viability Dye使用原理

—— 氨基反应性染料，与细胞表面或者内部的蛋白不可逆的结合

未标记的空白细胞		无荧光
标记后的活细胞只能染上表面蛋白		中等强度荧光
标记后的死细胞表面和内部的蛋白都染上		高强度荧光

实验步骤：

1、 将Fixable Viability Dye先平衡至室温；

2、 用不含叠氮钠、血清及蛋白的PBS将细胞洗两遍；

3、 用1ml PBS（不含叠氮钠、血清及蛋白）重悬细胞，至1-10^6/ml的浓度。

4、 加入1ul Fixable Viability Dye，立即涡旋混匀；

5、 2-8℃ 避光孵育30分钟；

6、 用PBS或者流式染色缓冲液洗1~2遍；

7、 固定、破膜进行胞内染色

Note：胞膜染色在染料染色前或后进行都可。

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实验结果示例

普通染色
区分死活细胞后只分析活细胞