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作者：联科生物 发布日期：2013-11-12 13:00
流式检测中，很多因素影响到实验的稳定性，数据表明，有三分之一的流式结果因为没有对样本处理进行优化，而需要重复以获得可靠的结果。这些优化的过程包括：FcR阻断、死活细胞鉴定、补偿调节标准化、红细胞裂解效果等。
一、FcR阻断
Fc受体是指细胞表面能够与免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM、IgE和IgD）结合的分子。其广泛存在于NK细胞、肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的表面。
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| Fig1：FcR的种类及分布 |
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FcR能够与抗体的Fc段结合，在检测时产生假阳性。
使用FcR阻断剂，可以消除假阳性，降低检测背景，获得更清晰的结果。
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相关产品：
| eBioscience
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85-14-9161-71
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Human Fc Receptor Binding Inhibitor Purified
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25 tests
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| eBioscience
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85-14-9161-73
|
Human Fc Receptor Binding Inhibitor Purified
|
100 tests
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| eBioscience
|
85-14-0161-81
|
Anti-Mouse CD16/CD32 Purified
|
50 ug
|
| eBioscience
|
85-14-0161-82
|
Anti-Mouse CD16/CD32 Purified
|
100 ug
|
| eBioscience
|
85-14-0161-85
|
Anti-Mouse CD16/CD32 Purified
|
500 ug
|
| eBioscience
|
85-14-0161-86
|
Anti-Mouse CD16/CD32 Purified
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1 mg
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| Liankebio
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AM1632-050
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Anti-Mouse CD16/32（FcR inhibitor）
|
50T
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| Liankebio
|
AM1632-100
|
Anti-Mouse CD16/32（FcR inhibitor）
|
100T
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二、细胞活力染料/死活细胞鉴定
死细胞同样会与抗体产生非特异性结合，造成检测的背景。
通常情况，会使用PI或者7-AAD来对死细胞进行染色，但是它们对核酸的结合不够稳定，洗涤会造成假阴性的结果；而且，这两种染料的光谱都非常宽，补偿难以调节，所以在多色检测、尤其是胞内染色时，需要用到可固定的细胞活力染料（Fixable Viability Dye）。
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激发/发射光 |
优势 |
劣势 |
| Fixable Viability Dye |
Violet / 450 nm |
多种颜色选择 |
价格稍贵 |
| Violet / 506 nm |
不可逆，可固定后检测 |
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| Red / 660 nm |
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| Red / 780 nm |
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| 7-AAD |
Red / 647 nm |
经济 |
不能用于胞内染色样品的死细胞鉴定 |
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补偿难以调节 |
| PI |
Red / 617 nm |
经济 |
不能用于胞内染色样品的死细胞鉴定 |
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补偿难以调节 |
相关产品：
| Liankebio
|
AP101-100-PI
|
PI solution
|
100T
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| Liankebio
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AP104-100-AAD
|
7-AAD
|
100T
|
| ebioscience
|
85-65-0863-14
|
Fixable Viability Dye eFluor 450
|
100 tests
|
| ebioscience
|
85-65-0863-18
|
Fixable Viability Dye eFluor 450
|
500 tests
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| ebioscience
|
85-65-0864-14
|
Fixable Viability Dye eFluor660
|
100 tests
|
| ebioscience
|
85-65-0864-18
|
Fixable Viability Dye eFluor 660
|
500 tests
|
| ebioscience
|
85-65-0865-14
|
Fixable Viability Dye eFluor780
|
100 tests
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| ebioscience
|
85-65-0865-18
|
Fixable Viability Dye eFluor780
|
500 tests
|
| ebioscience
|
85-65-0866-14
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Fixable Viability Dye eFluor 506
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100 tests
|
| ebioscience
|
85-65-0866-18
|
Fixable Viability Dye eFluor506
|
500 tests
|
| ebioscience
|
85-65-2860-40
|
Fixable Viability Dye eFluor 506/780 Sample Pack Kit
|
Kit
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三、补偿调节微球
合适的补偿调节是获得准确实验结果的前提，某些表达较低的指标，无法用单染的方法进行补偿调节，此时就需要使用补偿微球。相关产品：
| eBioscience
|
85-01-1111-41
|
OneComp eBeads
|
25 tests
|
| ebioscience
|
85-01-1111-42
|
OneComp eBeads
|
100 tests
|
| eBioscience
|
85-01-2222-41
|
UltraComp eBeads
|
25 tests
|
| eBioscience
|
85-01-2222-42
|
UltraComp eBeads
|
100 tests
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优点1：——无需另外调整设置，直接上样即可
UltraComp eBeads更适合紫光激发的荧光抗体
| 脾细胞 |
UltraComp eBeads |
某知名竞争品牌 |
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| Fig3：其他厂家的微球都需要再次调整 |
优点2 ——能与各种种属和亚型的抗体反映
| Product
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Species Compatibility
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Chain Recognition
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Features
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Mouse Ig
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Rat Ig
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Hamster Ig
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Rabbit Ig
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Kappa Light Chain
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Lambda Light Chain
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One Drop
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One Vial
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All cell sizes
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| UltraComp eBeads
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√※
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| OneComp eBeads
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√※
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| Competitor Anti-Mouse Ig, k
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| Competitor Anti-Rat Ig, k
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| Competitor Anti-Rat/Hamster Ig, k
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| Competitor PlusAnti-Mouse Ig, k
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|
| Competitor PlusAnti-Rat Ig, k
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| Competitor Anti-Mouse Bead Kit
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| Competitor Anti- Rat/Hamster Bead Kit
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| Competitor AntibodyCapture Bead Kit
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√※
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竞争品牌的微球是分种属的，使用不同抗体要购买多个产品以使用
注：兔来源的抗体与微球结合力较弱，但某些还是可以使用
| 优点3 ——适应各种孵育时间，结果稳定 |
优点4 ——价格相当，有小包装 |
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| Product |
Tests |
| OneComp eBeads |
25/100 |
| UltraComp eBeads |
25/100 |
| Competitor antibody capture kit |
100 |
| Competitor Anti-Mouse Ig, k |
100 |
| Competitor Anti-Rat Ig, k |
100 |
| Competitor Anti-Rat/Hamster Ig, k |
100 |
| Competitor Plus Anti-Mouse Ig, k |
100 |
| Competitor Plus Anti-Rat Ig, k |
100 |
| Competitor Anti-Mouse Bead Kit |
100 |
| Competitor Anti-Rat/Hamster Bead Kit |
100 |
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四、溶血素（红细胞裂解液）
由于各个公司的流式细胞仪光路设置不同，所以要根据机器厂商来选择合适的溶血素产品，才能获得良好的细胞分群，准确的选取要分析的细胞。
相关产品：
| LSC01/02
|
FCM Lysing solution for BC (ready-to-use)
|
100T/250T
|
含固定剂，适用于Beckman Coulter 流式细胞仪
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| LSB01/02/03
|
Lysing solution for FACS 10×
|
100T/250T/500T
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含固定剂，适用于BD 流式细胞仪
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| LYS01/02/03
|
FCM Lysing solution (Fixative Free) 10×
|
100T/250T/500T
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不含固定剂，适用于染色前溶血或间标流式
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五、流式染色缓冲液
流式染色缓冲液中通常含有BSA或者FBS/FCS等成分，可以有效降低染色过程中的非特异性结合。
特点：
1、使用方便 即用型
2、有效降低非特异性结合
3、适用于各种流式实验
相关产品：
| ebioscience
|
85-00-4222-57
|
Flow Cytometry Staining Buffer
|
200 mL
|
| ebioscience
|
85-00-4222-26
|
Flow Cytometry Staining Buffer
|
600 mL
|
| Liankebio
|
S1001
|
Flow cytometry Staining buffer
|
125ml
|
|
