ELISA系列 | ELISA检测TGF-β，样本该怎样活化？

Post published:2024-05-14
Post category:技术资料
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TGF-β超家族简介
TGF-β的分泌与活化
联科样本活化小妙招

TGF-β超家族简介

转化生长因子β（transforming growth factor β，TGF-β）是一类多效性细胞因子，在细胞增殖、分化、免疫调节及维持机体稳态等方面具有重要的作用。TGF-β包括三种不同的亚型：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3。TGF-β信号通路的异常与多种疾病的发生发展密切相关，如癌症、纤维化和神经退行性疾病等。TGF-β1基因结构具有高度保守性，人和小鼠TGF-β1的同源性高达99%。

TGF-β的分泌与活化

TGF-β最初以一种非活性的前体形式（latent TGF-β，L-TGF-β）被合成和分泌。

（A）TGF-β家族蛋白被合成为前体分子，由信号肽、前结构域和成熟多肽组成。去除信号肽后，通过碱性残基的蛋白水解裂解进一步加工前体，从而将前结构域与成熟多肽分离，后者保持非共价结合。

（B）潜伏的TGF-β 复合物可以通过与潜伏的TGF-β结合蛋白（LTBP）的二硫键结合成一个大的潜伏复合物（LLC），使潜在的TGF-β稳定储存而不是进一步激活。此外，潜伏的TGF-β还可与Treg或巨噬细胞表面的跨膜糖蛋白A为主的重复序列蛋白（GARP）和LRRC33结合。在LAP上的Arg-Gly-Asp（RGD）序列与整合素αvβ6或αvβ8相互作用后， TGF-β1和TGF-β2才从其潜伏复合物中变构释放。

（C）长细胞体从细胞体延伸，并将TGF-β家族受体呈递给配体复合物。配体与受体的结合导致II型受体（浅灰色）激活I型受体（中至深灰色）。

所以，TGF-β只有从潜伏复合物中释放出来，TGF-β才能具有活性，并激活其受体。

联科样本活化小妙招

机体多种细胞均可分泌非活性状态的TGF-β。在体外，非活性状态的TGF-β又称为latency associated peptide (LAP)，通过酸处理可被活化。

对于这个特殊的指标，联科生物经反复验证，提供以下步骤供参考（标准品已经是活化好的，无需活化）：
如Human TGF-β1 血清、血浆样本活化步骤：
01 加样：涡旋振荡混匀样本，血清、血浆取40 uL样本加入1.5 mL EP管中。细胞上清样本/尿液样本所需样本体积，具体请参考说明书。
02 加酸活化：加20 μL 1N HCl 混合均匀，室温孵育酸化10分钟。
03 加碱中和：加20 μL 1N NaOH 终止酸化。
04 样本活化结束。由于血清中TGF-β1含量较高，活化后血清样本需经20倍预稀释。细胞培养上清/尿液必须在活化后立即检测分析。