ELISA通关必备丨基础知识

ELISA
Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay

酶联免疫吸附检测，利用抗原抗体的特异性反应，对样本中可溶性目的产物进行定量检测。

ELISA 与常规免疫实验对比

ELISA样本制备简单；灵敏度高（pg/ml）；特异性强；重复性好；操作简单；检测仪器易获得。

Western Blot IHC/IF ELISA
定性 定性 定性
半定量 半定量 定量
半定位 定位 非定位
灵敏度中 灵敏度中高 灵敏度高
组织/细胞匀浆 组织/细胞切片 血清/血浆/细胞培养上清/体液/组织匀浆
对指标定位没有要求 胞内蛋白/膜蛋白 分泌蛋白/细胞因子

ELISA 种类

常见的ELISA四种，双抗夹心法、直接法、间接法、竞争法。近年，双抗夹心法中的一步法及多因子检测新技术也逐渐成熟。

不同 ELISA 检测方法比较

方法 适用范围 优势 劣势 备注
双抗夹心法 检测抗原最常用的方法，检测各种蛋白质大分子抗原 高灵敏、特异性强，抗原无需事先纯化 抗原必须拥有两个以上的结合位点 不能检测小分子抗原或半抗原，甄选抗体对，避免交叉反应或竞争相同的抗原结合位点
直接法 检测抗体最常用的方法，对于病原体抗体检测和诊断 操作简便，无需二抗，可以避免交叉反应 一抗需要酶标记，不是每种抗体都适合做标记，费用较高 一抗特异性非常重要
间接法 同上 二抗可以加强信号 交叉反应发生几率高 抗原纯度重要
竞争法 适用于检测特异性抗体，抗原中有不易去除的干扰物 快速、高效 整体的敏感性和专一性较差 主要适用于小分子和半抗原检测,如PEG2、Cortisol

ELISA 应用场景

ELISA测抗原

  • 细胞因子检测:TNF、VEGF、白介素等;
  • 肿瘤标志物:甲胎蛋白、癌胚抗原等;
  • 激素:胰岛素、雌二醇、皮质醇等;
  • 载脂蛋白:ApoA-l、Apo-E等;
  • 检测血液中的药物浓度:治疗心脏病的药物地高辛、抗生素庆大霉素等。

ELISA测抗体

  • 病毒检测:流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒、狂犬病毒等检测;
  • 自身免疫病抗体测定;
  • 过敏诊断:检测过敏原的抗体。

ELISA 应用领域