上一篇我们介绍了移液器的维护、校准，大家是否认识到，原来每天都要用的“枪”，并没有想象的那么简单！那么今天，我们将推出下篇，介绍移液器的使用。良好的移液操作规范，是实验成功的开始！一次移液操作，看似短短几十秒的瞬间，实际却可分解为装吸头、量程设定、润洗吸头、吸液、排液和吹液、以及退吸头六个步骤。
第一步：装吸头
√ 正确操作：
移液器套柄用力下压并小幅度旋转即可
× 错误操作：
用力敲击吸头。这样操作的后果是：
1. 吸头变形影响准确性；
2. 套柄在强力摩擦下磨损，影响密封，从而影响准确性；
3. 小量程移液器的套柄比较细，用力敲击可能会损坏套柄。
该步的不规范操作，在很多实验室经常能看到，可能大家习以为常，然而长此以往就会影响移液器的寿命和准确性！★ 该步骤不规范的移液操作可能带来0.1%到5%的移液误差，甚至更高！
第二步：量程设定
1.量程的设定原则：由大到小
1. 1 由大量程向小量程调节时：
如从600μl调节至400μl，直接调节
1.2. 由小量程向大量程调节时：
先朝所需量程方向连贯旋转，旋转到达超过所需量程1/3圈处，回调到所需量程处
如从20μl调节至50μl，先调节至53μl，再回旋至50μl
这是因为由小量程向大量程调节时，弹簧的弹性形变在短时间内无法完全回复，需有一个恢复阶段，可以想象一下刚从沙发上起身时，沙发垫恢复原状也是需要一定时间的。
★ 正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性！
2.量程范围的选择：
选择量程时，需要注意，一般在 10% - 100% 量程范围内可以操作，但在 10% 量程操作需要较高的操作技巧。因此建议的最佳量程是35% - 100% 量程范围。在此量程范围，对操作技巧依赖更少，并保证移液的准确性和精度。从表中可以看出，当选择的量程越小，移液的准确性和重复性就会越差。
★ 选择合适的吸头量程，可提高1%移液准确性！
第三步：润洗吸头
用同一样品对吸头进行润洗。先吸取样品，然后排回样品池或废液槽。充分吸液排液2-3次。
润洗的作用：
1. 在吸头内形成同质膜，降低吸头对样品的吸附；
2. 有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性。
注意：对于高温/低温样品，由于热胀冷缩带来更大的误差，不建议润洗。
★ 润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!
第四步：吸液
此步影响移液准确性的因素主要有以下4点：
1. 吸头浸入角度
建议尽量保持垂直，倾斜角度不大于15°。
正确的移液角度，可提高2.5%移液准确性！
2. 吸头的浸入深度
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吸头的外壁会粘上液体，尤其是液体较粘稠时，对准确性影响更大！
★ 以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%)！
3. 吸头浸入时间
吸液后保持吸头浸入液面最少1秒，然后将吸头平缓移开液面。对吸取大容量样品或者高粘度样品尤为重要。
4. 吸液速度
吸液通常采用一档吸液、二挡排液，在吸液时保持平顺，缓慢松开活塞，控制好吸液速度。过快的吸液速度，会导致形成气柱，使移液不准确；样品液进入套柄，对活塞和密封圈造成损伤；带入气雾，造成样品交叉污染。
★ 不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降！
第五步：排液和吹液
先将排液按钮按至第一档(排液档)，略作停顿以后，再按至第二档(吹液档)
常规排液操作：
1. 沿内壁排液(常规)
2. 直接排入液面下
直接排入液面排液时要保持活塞下压再离开液面，否则容易导致倒吸！
3. 在液面上方排液
★ 正确的排液技术提高1%的移液准确性！
操作一致性
保持一致的移液节奏，使活塞下压的速度和平稳一致
为了达到最好的操作一致性，可选择使用电动移液器，减少人为操作的影响
操作的一致性可提高1%的移液准确性！
★ 窍门：反向移液模式
适用于高粘度、挥发性的样品，如甘油、乙醇等，提高移液的准确性
同常规移液操作相反的流程，即二挡吸液、一档排液，具体操作请见下方
• 常规正向移液分为4步：
1. 将按钮从准备位置压到第1档；
2. 吸液：缓慢释放按钮，回复至准备位置；
3. 排液：将按钮从准备位置压到第1档，略作停顿后，将按钮压到第2档；
4. 松开按钮，回复至准备位置。
• 反向移液分为5步：
1. 将按钮从准备位置压到第2档；
2. 吸液：缓慢释放按钮，回复至准备位置；
3. 排液：将按钮从准备位置压到第1档；此时已完成所需体积液体的移液。
4. 将按钮从第1档压到第2档，回收或弃去吸头中残留的液体；
5. 松开按钮，回复至准备位置。
移 液 小 结
| 误差大小 | 误差范围 % | 技术操作 |
| 大 | 1.0%- 5.0% | 吸头浸入深度/角度不正确(特别注意微量程移液器)错误的吸液速度 |
| 中 | 0.5% -1.0% | 选择合适的量程吸头浸入深度吸液速度排液技术一致性 |
| 小 | 小于 0.5% | 量程设定 (已选合适量程)吸头浸入角度润洗手温影响 |
好了，本期的移液器操作介绍就到此为止了，希望能给您的实验带来帮助！后续将会给大家带来关于ELISA原理、操作、分析等方面的介绍
