凋亡试剂盒V13241和V13245检测步骤

该试剂盒在传统及Attune™声波聚焦流式细胞仪上验证过，使用Attune™声波聚焦流式细胞仪时，各种流速（25 μL/min 到 1,000 μL/min）都可以。

1.用有效方法诱导凋亡；设一不加诱导的阴性对照。

2.孵育之后收集细胞并用冷的PBS洗涤。

3.制备1×annexin V 结合缓冲液：按10次分析的量计算，加1 mL试剂C到4ml的去离子水中。

4.制备100μg/mL的PI工作液：用45μl 1×annexin V 结合缓冲液稀释5μl试剂B，剩余可保存备用。

5.再次离心步骤2中收集的细胞，弃去上清，重悬在1×annexinV 结合缓冲液。计数并用上述缓冲液稀释至约1 × 106 cells/mL。按每次实验用量100μl准备充分。

6.在每100μl细胞悬液中加入5μl试剂A和1μl步骤4制备的PI工作液。

7. 室温孵育15min。

8. 孵育结束，加400μl 1×annexin V 结合缓冲液，轻轻混匀后置于冰上。

9.尽快对染色细胞进行分析。可用FL1检测530nm激发光，FL3检测>575nm的激发光。细胞群将被分为三组：活细胞显示弱荧光，凋亡细胞显示绿色荧光，而死细胞则同时发红、绿荧光。

10. 可用荧光显微镜验证结果，适用检测FITC、TRITC或Texas Red®的滤光片检测。
图1. Jurkat细胞经10μM喜树碱处理4h(B)或不处理(A)的流式图。细胞经喜树碱处理后，凋亡细胞增多。A=凋亡细胞；V=活细胞；N=坏死细胞。