联科生物凋亡试剂盒AP101检测步骤

联科生物凋亡检测试剂盒（Annexin V/PI apoptosis kit，Cat#：AP101）是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪，荧光显微镜或其他荧光检测设备进行检测。

本试剂盒还提供了碘化丙啶（PI）染色液，PI可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同时期的细胞区分开来。

试剂盒组分

试剂盒步骤

样品处理

(1)、用合适的方法诱导细胞凋亡；

(2)、悬浮细胞离心（1500rpm 离心 5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化并用含血清培养基洗一次（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）；或直接用Accutase酶消化（无需终止）；1500rpm 离心 5min收集细胞；

(3)、用PBS洗涤细胞两次（1500rpm离心5min）收集1-5 X105细胞，弃上清；

(4)、制备1X Binding Buffer缓冲液：按10次分析的量计算，加1ml 5X Binding Buffer缓冲液到4ml的去离子水；

(5)、用500ul 1X Binding Buffer重悬细胞(第4步稀释的缓冲液）

(6)、加入5ul annexin-V FITC和10ul PI

(7)、避光室温孵育5分钟

(8)、上机检测

流式检测

流式分析Annexin-V FITC（放射波长=488nm；吸收波长=530nm）用FITC信号检测（通常是FL1通道）；PI染液用PE信号检测（通常是FL2通道）