ELISA实验常见问题及解决方案（二）

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作者：联科生物 发布日期：2014-01-30 14:00

感谢您从联科生物订购ELISA试剂盒，为使您的ELISA实验顺利实施，取得准确的结果，请您在实验前仔细阅读此实验指南。以下是影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案，希望能对您的ELISA检测有帮助：
专家问答为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？
温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。
如何获得良好线性的标准曲线？
按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
ELISA实验为什么必须设置复孔？
为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。

因为复孔检测可以：

★计算平均值，确保实验结果更准确；

★解决实验中误操作造成的跳孔现象；

★计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。
为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡？如何振荡？
振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。

孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高；洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

具体操作请参见说明书或致电联科生物（400-6721-600）。
何时终止ELISA反应？
ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最佳时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反应系统中，当最高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应；或者也可以根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。
为什么酶标仪读数时必须选用双波长？
首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰（标本的浓度，干扰色等）。一般采用最大波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收；因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。
为什么选择联科生物？
ELISA是蛋白定量检测的金标准，同时对实验操作的要求也极其严格。如果您希望获得准确、稳定的结果，希望拥有完美的数据分析，请选择联科生物，我们将在标准化的操作流程下为您提供高质量的检测服务。