树突状细胞(DC)是唯一能刺激初始T细胞活化的专职抗原递呈细胞，具有很强的抗原递呈功能，因此日益受到免疫治疗的科研和临床工作者的重视。然而因DC来源比较广，包括骨髓、外周血、脐带血等，导致目前对如何培养扩增 DC存在诸多不同的意见和方法。
本文参考国外文献，介绍了使用美国Peprotech公司的重组细胞因子将自体外周血单个核细胞培养成为DC并进行抗原肽负载的方法。该方法在美国已用于治疗前列腺癌的II期临床实验，因此极具有参考价值。
患者：
所有患者经确认均存在局部复发的前列腺癌，激素抵抗性前列腺癌或晚期前列腺癌
细胞因子和抗原肽：
细胞因子：重组人 GM-CSF，产品标号：300-03，生产商：Peprotech
重组人 IL-4，产品标号：200-04，生产商：Peprotech
肽：有 HLA-A0201 特异性结合位点的 PSMA(前列腺特异性膜抗原)肽，包括 PSM-P1，序列 为 LLHETEDSAV 和 PSM-P2，序列为 ALFDIESKV。
DC 培养：
1. 用 Lymphoprep(Invitrogen 公司)或 Histopaque 1077(Sigma 公司)分离患者外周血的单个 核细胞(PBMC)；
2. 将 PBMC 悬浮在完全培养液中，完全培养液为含 5%热灭活的自体血浆的 OPTIMEM 培养液(Gibco-BRL 公司)；
3. PBMC细胞悬液铺在 75cm2培养瓶中，2-3 x 107个细胞/瓶。
4. 置 37℃，5％CO2的培养箱中孵育 1 小时；
5. 吸除未贴壁细胞。用预热到 37℃的完全培养液将贴壁细胞轻柔洗涤一次；
6. 在贴壁细胞上加入 10ml DC 扩增培养液，其为含 500units/ml GM-CSF 和 500 units/ml IL-4 的完全培养液。
7. 培养 7 天后，获得未成熟的 DC。
肽负载：
1.将上面培养获得的 DC 与 10ug/ml PSM-P1 和 PSM-P2 共同孵育 2 小时；
2.洗涤一次，并重悬于 10ml 注射用的生理盐水中。
II 期临床试验：
每隔 6 周将肽负载的自体 DC 注射给患者一次，共计 6 次。每次注射 100ml 的 DC，并注意在不少于 30 分钟的时间内完成；
参考文献
Lodge PA, Jones LA, et al. Dendritic cell-based immunotherapy of prostate cancer: immunemonitoring of a phase II clinical trial. Cancer Res, 2000; 60(4):829-33
