细胞周期检测-知识点汇总

流式细胞术分析细胞周期的原理

在细胞周期的不同时期，DNA含量存在差异，用DNA染料进行染色（如应用最广泛的染料PI），DNA含量多，荧光强度高，DNA含量少，荧光强度低，因此可以根据DNA荧光强度的变化，来判断细胞处于哪个时期。

利用PI分析细胞周期，需要加入RNase消除RNA的影响

PI是通过插入双螺旋结构中叠加在一起的碱基对核酸进行染色的，并且它可以插入所有DNA和RNA的双链区，PI不是DNA特异性的，所以需要加入RNase消除RNA的影响。

细胞周期检测时，一定不要洗涤

不同于蛋白染料和细胞之间的牢固结合，DNA与染料的结合是一种结合态和游离态之间松散的平衡，不是很牢固，所以洗涤步骤会造成染料丢失，降低核酸的特异性荧光，造成测量值变小，因此，DNA染色时一定不要洗涤。

固定细胞和活细胞的细胞周期检测

PI、7-AAD、TOTO-3和YOYO-1等染料不能透过完整的细胞膜，在染色时，一般需要用70%乙醇固定、通透细胞膜，从而使这些染料进入细胞核内与DNA结合，所以市面上很多的细胞周期检测试剂盒都是需要固定细胞的；如果想要检测活细胞样本，可以选择联科生物的细胞周期检测试剂盒，不仅可以检测固定细胞，也可以检测活细胞。

其他应该注意的问题

• 仪器：定期清洗喷嘴，激光预热时间充分，低流速进样等。

• 样本：消化要充分，但不能过度，保证细胞不粘连、不破裂，染色要充分等。