BrdU/PI 双参数分析细胞周期

  • Post category:生物资讯
  • Post views:7501 次访问

http://www.liankebio.com/article-information_Newsletter-2892.html

作者：联科生物 发布日期：2020-03-25 09:00

1. 检 测 原 理 ：
5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)，是人工合成的胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，在DNA合成过程中(S 期)，BrdU能够代替胸腺嘧啶掺入正在复制的DNA分子中。BrdU与PI同时染色，通过流式细胞术可以直接测定出合成期的细胞比例，避免PI单独染色分析时的主观估计，能更好地反映细胞的合成期情况。
2. 注 意 事 项：
染色时，必须保证变性DNA的结构完全打开，使细胞核中的BrdU暴露出来，这样才能与荧光抗体充分结合。如DNA结构未完全打开，荧光标记就会很弱；如DNA变性过度，DNA发生解链，PI标记也会很弱；所以，以上两种情况都不能正确地反映细胞周期的真实情况。

加热变性DNA的方法比较剧烈，可选择采用酸化或者DNase消化变性的方法，减少对其他细胞蛋白的损伤，但仍建议BrdU/PI双染的细胞不宜再同时标记其他抗原。
3. BrdU/PI 双染 的 优 点：
DNA变性时可同时被PI染色，这样就能够准确定量S期细胞，分析掺入了BrdU的细胞（增殖的细胞）在细胞周期中所处的阶段(G0/G1、S、G2/M)，如下BrdU/PI双染的流式图，横坐标是DNA用PI染色，纵坐标是BrdU用FITC染色，细胞的各个时期如下图所示。这种方法虽然耗时，但却是一种能够准确定量S期细胞的好方法，能将G0/G1、S和G2/M期区分得很清楚，这是PI单染做不到的。

4. 产 品 推 荐 ：

目录号 产品名称 规格 目录价
CP001 BrdU Cell Proliferation Assay Kit 50T 4500

5. 试 剂 盒 组 分 ：

组分编号 组分名称 瓶/管盖颜色 规格 储存条件
CP001A Positive Control Cells 白色 5 ml -20℃避光
CP001B BrdU Solution 粉色 1.2 ml
CP001C Wash Buffer 蓝色 175 ml 2 - 8℃避光
CP001D Rinse Buffer 红色 130 ml
CP001E Denaturation Buffer 无色 60 ml
CP001F Neutralization Buffer 绿色 60 ml
CP001G FITC anti-BrdU 橙色 300 µl
CP001H PI/RNase A Staining Buffer 棕色 23 ml