银屑病是一种慢性T细胞介导的炎症性皮肤病，以角质细胞(KC)增生为特征。
甲氨蝶呤(MTX)具有抗增殖和免疫调节作用，是皮肤科广泛应用的化疗药物。口服MTX是治疗中重度银屑病的一线低成本疗法，但是，口服MTX产生的肝毒性和肾毒性限制了其应用。此外，银屑病是一种复杂的疾病，对MTX或其他单一疗法没有充分的反应。因此，研究者们希望开发出联合治疗策略，以优化银屑病的治疗结果。
2015年有研究表明，光动力疗法(PDT)在银屑病等浅表皮肤病的治疗中具有快速、无创、美容效果好等优点。基于5-氨基乙酰丙基戊酸(ALA)的PDT (ALA-PDT)已被美国食品和药物管理局批准。外源ALA能够在细胞内代谢为光敏剂原卟啉IX (PpIX)，积累的PpIX在光照后产生活性氧(ROS)，导致靶细胞凋亡、靶组织坏死。然而，ALA的亲水性阻碍其渗透到银屑病皮肤的厚角质层(SC)，减弱ALA- PDT抗银屑病的效果。因此，提高PDT治疗银屑病的效率是非常有必要的。现在，PDT已与化疗或免疫治疗联合使用以提高疗效。利用MTX和ALA-PDT治疗银屑病的优势，将MTX和ALA-PDT联合使用是一种很有前途的方法。然而，同时使用MTX和ALA并提高其皮肤渗透性仍然是一个挑战。
2021年，有研究者以具有良好生物相容性和生物降解性的壳聚糖(CS)和透明质酸(HA)两种多糖为载体，制备了用于皮肤局部治疗的药物包封纳米载体。CS是一种阳离子多糖，可用作局部抗菌剂和渗透增强剂；HA是一种天然阴离子粘多糖，是皮肤细胞外基质的主要成分。基于HA的水凝胶已被广泛研究，以用于皮肤病的治疗。CD44是HA的受体之一，在银屑病皮肤细胞中高表达，提示CD44可以作为银屑病治疗的纳米载体药物潜在靶点。
最近，中山大学药学院的研究团队在Carbohydrate Polymers上发表了题为Chitosan/hyaluronan nanogels co-delivering methotrexate and 5-aminole-vulinic acid: A combined chemo-photodynamic therapy for psoriasis的文章。文章介绍了该团队制造了用于MTX和ALA同步传输的CS/HA 仿生纳米凝胶（MTX-ALA NGs），并将其用于体外和体内的渗透实验，对其同时递送MTX和ALA的效率进行了评估，以探索治疗银屑病的更高效的方法。
MTX-ALA NGs的制备与表征
首先，研究者利用CS的正电荷与HA的负电荷之间的静电相互作用，使二者进行物理交联(自组装)。同时，利用交联剂TPP使NPs进一步致密化，形成穿插的聚合物网络。之后，研究者成功利用CS/HA NGs对MTX和ALA进行了封装，制备出MTX-ALA NGs。
MTX-ALA NGs的皮肤渗透
研究者对MTX-ALA NGs的皮肤渗透能力进行测定。结果表明，MTX-ALA NGs实验组的PpIX水平显著高于MTX-ALA悬液组，证实了NGs的递送形式增强了ALA的局部吸收，且吸收的ALA能够有效转化为PpIX。另外，MTX-ALA NGs增强了MTX在皮肤中的渗透。
MTX-ALA NGs细胞摄取和细胞PpIX的检测
研究者利用共聚焦激光扫描显微镜技术（CLSM）对MTX-ALA NGs的细胞摄取水平和细胞内PpIX的水平进行了检测。结果显示，MTX-ALA NGs的递送形式明显增强了细胞对MTX 和 ALA的摄取，且MTX-ALA NGs处理的细胞，其PpIX荧光强度明显强于ALA溶液或MTX-ALA悬液处理的细胞。
细胞凋亡检测
究者用HaCaT细胞作为银屑病炎症细胞模型，并刺激其过度增殖。之后，研究者分别使用ALA、MTX-ALA悬液、MTX-ALA NGs与细胞共同孵育24h。孵育期间，三组细胞均给予4h的PDT处理。结果显示，MTX-ALA NGs+PDT对细胞增殖的抑制效果最佳，MTX-ALA悬液+PDT的效果其次，ALA+PDT的效果为三组中最弱。这与MTX-ALA NGs的递送形式增强了细胞对MTX和ALA的摄取能力有关。
之后，研究者利用流式细胞术检测了分别与MTX、ALA、MTX-ALA悬液、MTX-ALA NGs孵育后，HaCaT细胞凋亡率。结果显示，MTX-ALA NGs组的细胞凋亡率最高，表明MTX-ALA NGs在诱导过度增殖细胞的凋亡方面的效率最高。
综上所述，MTX-ALA NGs的药物递送形式既可以增强MTX、ALA对HaCaT细胞增殖的抑制效应，又可以促进HaCaT细胞的凋亡。
综上所述，该研究表明了CS-HA NGs能够同时装载MTX和ALA，促进二者在皮肤中的渗透，使二者更多地被细胞摄取。结合光动力学疗法，可增强MTX和ALA对角质细胞增殖的抑制效应，促进角质细胞凋亡。这些研究结果为银屑病的化学-光动力学联合疗法的开发提供了新策略。
实验做得好，试剂一定错不了。在本研究的细胞凋亡检测实验中，研究者们使用了联科生物自主研发的细胞凋亡试剂盒。
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