流式技术丨凋亡阳性质控液，补偿调节的好帮手

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Annexin V流式分析细胞凋亡，虽然操作很简单，但要得到真实的实验数据，需要设置多种对照来排除干扰因素的影响：

  • 空白对照—不加染料的实验组，用来调节电压，圈门；
  • 阳性对照—对确有凋亡的阳性细胞进行单染，用来调节补偿；
  • 阴性对照—健康细胞或阴性对照的双染，排除细胞本身状态及操作不当的误差；
  • 实验组—需要知道凋亡情况的处理组。

联科生物的Annexin V系列凋亡检测试剂盒，除了操作简单，分群清晰，多种标记可供选择外，独家配备凋亡阳性质控液（Apoptosis Positive Control Solution），无需单独购买，包含在联科生物凋亡试剂盒中。

凋亡阳性质控液是补偿调节的好帮手，同时可以作为一个实验凋亡处理过程的阳性组，操作步骤简单：

  1. 收集1 × 106 - 3 × 106 个细胞，用预冷PBS离心洗涤两次，弃上清。
  2. 加入500μl Apoptosis Positive Control Solution重悬，置冰上孵育30分钟。
  3. 用预冷PBS离心洗涤，弃上清。
  4. 加入适量预冷1 × Binding Buffer重悬，并加入数量相同且未经处理的活细胞与之混合。加入预冷1 × Binding Buffer补充至1.5ml，等分成三管，其中一管为空白对照管、两管为单染管。
  5. 单染管分别加入5μl Annexin V-FITC或10μl PI，室温避光孵育5分钟。
  6. 在流式细胞仪上，用空白管调节FSC、SSC和荧光通道的电压，并在此电压条件下，用单染管调节荧光通道的补偿。

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