http://www.liankebio.com/article-information_Newsletter-1002.html
作者：QIAGEN官网 发布日期：2014-10-03 13:00
|
REPLI-g WTA Single Cell Kit能够在单细胞转录本水平上对转录调控的影响进行可靠的研究，并允许从单细胞（1–1000个细胞）进行所有转录物的均一扩增。专用的缓冲液和试剂经过了独特的、可控的净化步骤以防止REPLI-g技术扩增污染的核酸。创新的裂解液可以有效地稳定细胞RNA，以确保所得到的RNA准确地反映体内基因的表达图谱。所有的酶促步骤已经过专门改进，使得用于cDNA准确扩增的RNA得到高效处理。而扩增步骤则采用创新的多重置换扩增（MDA）技术，序列偏差可以忽略不计。
性能：
蛋白编码RNA的数量多
扩增富集mRNA的RNA (poly A+)的能力，使REPLI-g WTA Single Cell Kit特别适用于通过NGS研究单细胞转录本水平上的转录调控影响。产生超过90％的NGS片段的核糖体RNA（rRNA）扩增几乎完全被消除，可产生有意义的mRNA-Seq数据。
可靠检测低丰度转录本
单细胞分析的挑战性大，尤其是同一细胞内的转录本丰度差异很大时。为获得准确的结果，应确保全转录组扩增时可靠扩增所有转录本。REPLI-g WTA Single Cell Kit高度适合于但细胞中转录本分析，即便是低丰度转录本。对使用REPLI-g技术扩增的转录本abl-1进行real-time PCR分析，结果显示即便是低丰度转录本也能在使用该试剂盒扩增后，得以可靠的检测。
多种研究领域的应用
REPLI-g WTA Single Cell Kit可以从单细胞（如肿瘤细胞、干细胞或分选细胞）有效地扩增获得cDNA，并从纯化的总RNA或poly A+ RNA（10 pg–100 ng）生成和扩增cDNA，适合于广泛的研究领域。
根据研究需要，QIAGEN针对从单细胞扩增cDNA或纯化RNA提供了不同的实验方案：从单细胞扩增mRNA（poly A+）3'端区域：
只扩增带有poly A +尾巴的mRNA（和其他的RNA），适合于广泛的应用，包括NGS(RNA-Seq）、real-time PCR和微阵列分析。
从单细胞扩增总RNA：
可扩增完整的转录本，包括带有和不带有poly A +尾的RNA，lnc RNA和linc RNA。需要注意的是，rRNA也将扩增并且扩增程度很高。如果用序列特异性探针（例如用qPCR或阵列协同工作），扩增的rRNA并不会影响下游应用的结果。如果将扩增的RNA用于RNA-Seq，请注意超过90％的片段来自于rRNA，因此进行全转录本测序时必须获得充足的读段。
纯化RNA的扩增
?针对从总RNA或富集RNA模板进行全转录本扩增的情况而优化，非常适合于大规模应用，包括NGS、real-time PCR和微阵列分析。
应用：
REPLI-g WTA Single Cell Kit可以从非常小量的样本均一地扩增全部的转录物，以非常有限或甚至可忽略地偏差扩增，准确呈递单细胞的转录模式。根据实验方法，扩增的cDNA非常适用于二代测序（RNA-Seq）、基因表达芯片或qPCR应用。
REPLI-g WTA Single Cell Kit可用于全转录本扩增的分析：
?◎带poly A+尾巴的mRNA
?◎总RNA
?◎RNA转录组的所有区域
?◎mRNA的3'末端
?◎Lnc和Linc RNA
其不适合用于与小量核酸等一起使用：tRNA和miRNA相关产品信息：
|
产品货号
|
产品名称
|
|
Y5-150063
|
REPLI-g WTA Single Cell Kit (24)
|
|
Y5-150065
|
REPLI-g WTA Single Cell Kit (96)
|
|
