酸性磷酸酶活性检测试剂盒

Post published:2015-07-30
Post category:生物资讯
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作者：联科生物发布日期：2015-07-30 07:00

酸性磷酸酶 (acid phosphatase) 是一种在酸性条件下催化磷酸单酯水解生成无机磷酸的水解酶，主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。正常人血清中的酸性磷酸酶来源于骨、肝、肾、脾、胰等组织，故不论男女老幼，其含量大致相同。而前列腺患者以及出现肝炎、甲状旁腺机能亢进、红血球病变等疾病时，血清中酸性磷酸酶的活力都会升高。联科生物的酸性磷酸酶活性检测试剂盒以4-硝基苯磷酸盐(pNPP)为底物，可方便、快捷、灵敏地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中的酸性磷酸酶活性。
一、试剂盒组分

二使用方法
1.试剂准备：取出所有试剂(包括检测样品)，恢复至室温。

标准品工作液：取15 μl p-nitrophenol溶液(10 mM)，用检测缓冲液稀释至0.3 ml，最终浓度为0.5 mM。

2.检测方案参考如下。标准品的用量分别为2、4、8、16、24、32和40 μl，推荐设两个重复。样品通常加40 μl，如样品中的酸性磷酸酶活性过高，可减少样品用量或适当稀释后。为消除有色样本本身颜色的影响，需设立样品对照孔，即加入样本，以检测缓冲液代替显色底物的对照。

	标准品(μl)	样品(μl)	空白对照(μl)
检测缓冲液	80 - x	80 - y	40
显色底物	—	80	40
样品	—	y	—
标准品工作液	x	—	—

3.加完所有样品后，在微孔板震荡器上震荡混匀数十秒。37℃避光孵育5 - 10分钟。若待测样品中酸性磷酸酶活性较低，可适当延长孵育时间至30分钟。

4.每孔加入160 μl终止液终止反应。

5.在405 nm或400 - 415 nm范围内检测吸光度。如不能立即测定，可在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时内稳定。

6.结果计算：将标准品孔的OD值减去空白对照孔的OD值，校准后的标准品孔OD值与对应的p-nitrophenol浓度建立标准曲线。样品孔的OD值减去样品对照孔的OD值，校准后的样品OD值代入标准曲线，计算p-nitrophenol浓度。

酸性磷酸酶活性(U/ml) = A/V/T。其中A为样品中产生的p-nitrophenol量(μmol)；V为样品体积(ml)；T为反应时间(min)。

7.酸性磷酸酶活性单位的定义：在pH4.8、37℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1 μmol p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。
三注意事项
1.样品中不能含有磷酸酶抑制剂，如EDTA、草酸盐、氟化物和柠檬酸盐等。

2.所有样品避免反复冻融，建议分装后冻存。

3.血清样品通常需10倍稀释，其它样品可做梯度稀释，使OD值落于标准曲线检测范围内。可用原裂解液或PBS或本试剂盒提供的检测缓冲液进行稀释。

4.为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。

5.更多产品敬请关注联科生物网站或来电咨询。
四结果示例

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