转GFP细胞增殖的示踪的工具

Cell Proliferation Dye eFluor® 670 应用于转GFP细胞增殖检测的荧光染料，分子量是792.6， 最大荧光激发波长是647 nm，发射波长是670，可以使用跟APC或Alexa Fluor® 647一致的滤片。Cell Proliferation Dye eFluor® 670标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。Fluor® 670可以检测分裂多达6次的细胞增殖，也可以用于标记细胞的长期示踪。优势：

? 能够与FITC或GFP联用

? 检测分裂多达6次的细胞增殖

? 广泛用于体内和体外实验

? 与荧光素PE无需补偿调整

图1. 采用Cell Proliferation Dye eFluor® 670通过流式细胞仪检测获得的检测结果如右图。小鼠脾脏细胞加入5 µM Cell ProliferationDye eFluor® 670荧光染料。蓝色曲线代表培养0天，紫色曲线代表培养三天。

Cell Proliferation Dye eFluor® 670标记实验操作步骤：

加入126 µl 无水DMSO重悬Cell Proliferation Dye eFluor® 670冻干粉，储存浓度为5 mM。避光储存于-20度，保持干燥。避免反复冻融。

1. 制备单细胞悬液，细胞浓度为106-107/ml之间。

2. 加入2 ml PBS离心洗涤两次。

3. 用PBS重悬细胞，细胞终浓度达到初始细胞浓度的两倍。当细胞总数少于5x106时，加入大于0.5 ml的PBS。

4. 用PBS稀释Cell Proliferation Dye eFluor® 670储存液，浓度达到10 µM。PBS需提前预热到室温。

5. 按1:1的比例混合细胞悬液，37度避光孵育10分钟。推荐使用5 µM浓度的Cell Proliferation Dye eFluor® 670作为标记细胞的起始浓度。高于10 µM 的染料浓度将阻碍细胞的增殖并且降低标记细胞的活性。

6. 加入4-5倍体积的预冷的完全培养基（包含10%血清）冰上孵育5分钟，用于中止荧光素标记。

7. 用完全培养基洗涤3次。

8. 按个人需求培养或转入体内。