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Th1/Th2可分泌多种细胞因子，参与不同免疫应答：
Th1
分泌 IFN-γ、IL-2、TNF-α 等细胞因子，主要介导细胞免疫应答，调节细胞毒性T细胞分化和参与迟发型超敏反应；
Th2
分泌 IL-4、IL-10、IL-13 等细胞因子，主要介导体液免疫，促进B细胞增殖、分化和产生抗体。
联科生物可提供小鼠/人的Th1、Th2、Th17和Treg检测试剂盒。以小鼠Th1/Th2检测为例。
样本采集及制备
血液样本
小鼠血液样本一般采用眼眶后静脉丛采血法，因此法不需麻醉或处死小鼠，对小鼠的伤害小，且可重复采血，具体方法如下：
1.穿刺采用一根特制的长7～10 cm硬的玻璃取血管，其一端内径为1～1.5 mm，另一端逐渐扩大，细端长约1cm即可，将取血管浸入1％肝素溶液，干燥后使用；
2.采血时，左手拇指及食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定，并轻轻压迫颈部两侧，阻碍静脉回流，使眼球充分外突；
3.右手持取血管，将其尖端插入内眼角与眼球之间，轻轻向眼底方向刺入，当感到有阻力时即停止刺入，旋转取血管以切开静脉丛，血液即流入取血管中；
4.采血结束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。
注：
a.用本法在短期内可重复采血。小鼠一次可采血0.2～0.3 ml；
b.为适用于Th1/Th2检测，需用肝素钠来处理取血管，不可用肝素锂、EDTA或枸橼酸钠。
脾 单 细 胞 悬 液 的 制 备
脾单细胞悬液的制备通常有两种方法，可依据自己的喜好及习惯来选择。
（1）研 磨 法
1.小鼠用CO2处死，立即无菌取脾；
2.将脾浸入装有冷PBS的培养皿中，用钝头剪刀剪去白色的结缔组织，换入另一个装有冷PBS的培养皿中以清洗脾脏；
3.再次换入一个装有冷PBS的培养皿中；
4.用小的弯头手术剪剪切脾脏成3 mm左右的小块；5.用5 ml或10 ml塑料一次性注射器的尾部背面轻轻按压研磨脾脏小块，此时会看到很多脾单细胞进入PBS中。对于一只30克左右的小鼠，完全研磨脾脏后约可获得100 x 106左右的细胞；
6.经200目筛网过滤获得单细胞悬液，用冷PBS洗涤2次，每次1000 r/min, 离心10分钟；
7.将细胞悬浮于RPMI1640(含10%热灭活FBS)中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)；
8.调节细胞浓度为2 x 106/ml。
（2）穿 刺 法
1.小鼠用CO2处死，立即无菌取脾；
2.将脾浸入装有冷PBS的培养皿中，用钝头剪刀剪去白色的结缔组织，换入另一个装有冷PBS的培养皿中以清洗脾脏；
3.用10 ml注射器的针头在脾脏表面密密麻麻穿刺；
4.用针头吸取培养皿中的PBS，用力注入脾脏中，细胞即会从小孔中流出；
5.彻底冲出脾细胞，用玻璃吸管吸取细胞悬液；
6.经200目筛网过滤获得单细胞悬液，用冷PBS洗涤2次，每次1000 r/min, 离心10分钟；
7.将细胞悬浮于RPMI1640(含10%热灭活FBS)中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)；
8.调节细胞浓度为2 x 106/ml。
淋 巴 结 单 细 胞 悬 液 的 制 备
1.小鼠用CO2处死，立即无菌取出腋下和腹股沟淋巴结；
2.将淋巴结浸入装有冷PBS的培养皿中，用钝头剪刀剪去脂肪组织，换入另一个装有冷PBS的培养皿中以清洗脾脏；
3.再次换入一个装有冷PBS的培养皿中；
4.用小的手术剪剪切淋巴结成3-4 mm大小的小块；
5.在培养皿中放置一个孔径为20 um的筛网，用5 ml或10 ml塑料一次性注射器的尾部背面轻轻按压小块，使得淋巴结的单细胞通过筛网进入其下面的PBS液中；
6.用冷PBS洗涤2次，每次1000 r/min, 离心10分钟；
7.将细胞悬浮于RPMI 1640(含10%热灭活FBS)中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)；
8.调节细胞浓度为2 x 106/ml。
刺 激 及 染 色
1a.对于肝素抗凝血，取125 μl抗凝血至流式管中，加入125 μl不含血清的培养基和1μl PMA/Ionomycin Mixture (250×)和1 μl BFA/Monensin Mixture (250×)。取125 μl抗凝血和125 μl不含血清的培养基，作为对照。混匀，37℃孵育4-6小时，每隔1-2小时取出震荡混匀；
注：肝素抗凝血样本也可选择方法1b进行处理，在我们的试验结果中，比全血样本能检测到更多的细胞因子，原因未知；
1b.对于使用其它抗凝剂(如EDTA、枸橼酸钠)抗凝血，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs)。用含10%胎牛血清的培养基重悬沉淀，使细胞浓度为1×107/ml。取250μl PBMCs至流式管中，加入1μl PMA/Ionomycin Mixture (250×) 和1μl BFA/Monensin Mixture (250×)。以只含PBMCs的样本作为对照。混匀，37℃孵育4-6小时，每隔1-2小时取出震荡混匀；
1c.对于脾脏组织，使用适当的方法制备成单细胞悬液，并去除团块。(可选)使用淋巴细胞分离液分离制备脾单个核细胞。用含10%胎牛血清的培养基重悬沉淀，使细胞浓度为1×107/ml。取250 μl细胞悬液至流式管中，加入1μl PMA/Ionomycin Mixture (250×)和1 μl BFA/Monensin Mixture (250×)。以只含细胞悬液的样本作为对照。混匀，37℃孵育4-6小时，每隔1-2小时取出震荡混匀；
注：在我们的试验结果中，脾细胞经淋巴细胞分离液分离后能检测到更多的细胞因子，原因未知；
2.从样本管和对照管中取100μl细胞悬液至新的流式管中，加入5μl Anti-Mouse CD3ε, FITC 和5 μl Anti-Mouse CD4, PerCP-Cy5.5。震荡混匀，室温避光孵育15分钟；
3.每管加入100 μl FIX & PERM Medium A，震荡混匀，室温避光孵育15分钟；
4.用蒸馏水将10× Flow Cytometry Staining Buffer稀释为1×，每管加入2 ml预冷1×Flow Cytometry Staining Buffer，300 g离心5分钟，弃上清；
注：液体尽量倒干净，不要有残留；
5.每管加入100μl FIX & PERM Medium B、5μl Anti-Mouse IFN-γ, PE和5μl Anti-Mouse IL-4, APC。震荡混匀，室温避光孵育15分钟；
6.每管加入2 ml 1× Flow Cytometry Staining Buffer，300 g离心5分钟，弃上清；
7.每管加入500μl 1× Flow Cytometry Staining Buffer重悬，上机检测；或者加入500 μl 1-4%多聚甲醛重悬，2-8℃避光，于24小时内检测。
