啥都能用多聚甲醛固定吗？

然而，可能很多人忽视了一点，就是如果在染色之前用多聚甲醛固定标本，细胞表面有些位点在固定后构象发生改变，使得抗体无法结合产生假阴性，也可能由于固定作用，导致其它位点产生非特异性结合（假阳性）。

因此，知道哪些抗体染色前不能预固定，十分重要。贴心的技术人员帮我们做了一系列测试，下面两张表，可以看的出来，大多数不能固定的抗体都是趋化因子受体类目的，这类抗体，大家在实验中要注意不能先固定后染色。
—— 人源样本——

—— 小鼠样本 ——

多聚甲醛染色后固定
染色后的固定，就与抗原构象关系不大了，更多的是荧光素。以前4色以内的时候，用的荧光素都是非串联的，因此大多数影响不大，但随着各种新型串联染料的出现，多聚甲醛固定就成了问题了。

事实上，当你去搜索串联染色标记（如PE-cy7、APC-cy7等）的抗体时，会发现一些比较详细的描述里面会注明，用多聚甲醛固定过的样本，必须在4小时内检测，否则容易导致串联染料降解，若要长时间保存，还是需要洗涤后，转移到不含多聚甲醛的缓冲液中。

需要注意的是，做GFP荧光检测的同学，也需要注意一下，多聚甲醛固定也会影响GFP，多聚甲醛固定后，并非使GFP荧光淬灭，而是使GFP蛋白构象发生改变，无法产生荧光。有时候你固定后检测到的荧光可能是自发荧光，或剩余的未被改变构象的GFP发出的。
解决方案
1、 如果检测的是前述表格中容易被多聚甲醛影响的分子，请尽量不要预固定，如需长期保存样本，可以考虑冻存单个核细胞2、 如果检测的是前述表格中不会受多聚甲醛影响的分子，可用1％多聚甲醛固定保存，但FSC、SSC和荧光强度影响较大。3、 如果希望在染色后保持较长时间荧光稳定，仍首选建议：避光、4度，如果仍不放心，可考虑购买商品化的适用于串联染料的专用固定剂。