PeproTech-ELISA试剂盒常见问题汇总

  • Post category:生物资讯
  • Post views:3111 次访问

http://www.liankebio.com/article-information_Tech-265.html

作者：联科生物 发布日期：2015-11-09 00:00

1. PeproTech的一个ELISA试剂盒（EDK）能检测多少块板？一个标准ELISA试剂盒所含组分足够检测10块96孔板，而一块Mini ELISA试剂盒所含组分足够检测2块96块。
2. PeproTech ELISA试剂盒中所含的HRP结合物的稳定性如何？ABTS ELISA试剂盒中的Avidin-HRP 在2-8℃最多稳定一个月，分装并冻存于-20℃以下则可最长稳定2年，避免反复冻融。TMB ELISA试剂盒中的链霉亲和素-HRP可以在2-8℃中稳定半年。
3. 如何获得试剂盒的交叉反应信息？PeproTech在实验室内自行测试了其ELISA试剂盒的交叉反应性，可在说明书中查看测试结果。
4. ELISA实验过程中如果想周末停一下怎么办？可以在周五用包被抗体包板，然后放4℃保存，下周一再继续实验，请注意：抗体包被时间的改变可能会引起板间结果的差异。
5. PeproTech的EDK是否适用于所有类型的样本？虽然PeproTech没有用其试剂盒对每种样本进行测试，但这些试剂盒应该适用于（但不仅限于）以下标本：血清、血浆、细胞培养上清、尿液和唾液。
6. 显色反应需要终止吗？Avidin-HRP和底物ABTS的显色反应是不需要终止的，当标准品的零孔OD值小于0.2，或最高浓度孔OD值小于1.2时，通常可以获得可靠的标准曲线，如要终止显色反应，可以用1%SDS作为终止液。虽然资料显示SDS是ABTS的最适终止液，但PeproTech并未在实验室中使用终止液。
7. PeproTech的ABTS EDK可以用TMB作为底物吗？PeproTech的EDK是用ABTS进行优化的，因此最好使用ABTS作为底物，这些试剂盒也与TMB配合使用，但需要做一些调整：
? 试剂盒中的Avidin-HRP不能与TMB配对，必须另购链霉亲和素-HRP；
? 链霉亲和素-HRP的工作浓度需要优化；
? 使用链霉亲和素-HRP和TMB时，通常需用终止液，请按照说明书操作；
? 加终止液前，TMB的反应时间需要优化；
? 使用推荐的酶标板，并在450nm读取吸光值，校正波长为650nm。
8. EDK组分中为什么要添加D-甘露醇？在EDK组分中加入D-甘露糖的目的是使蛋白/抗体可见，这不会影响ELISA的检测结果。
9. 是否可以将EDK说明书中的曲线作为我的标准曲线？每块ELISA板必须单独做标准曲线，也就是说，一块板的标准曲线不能用于另一块板，PeproTech的EDK说明书中提供的标曲是在自己的实验室中做出来的，仅可用作示例。
10. PeproTech的标准曲线是如何生成的？在实验室中做ELISA时，PeproTech会用Molecular Devices公司的酶标仪读取吸光值，然后用SOFTmax PRO软件进行结果分析，该软件能将获取的数据进行四参数曲线拟合。
具体的算法如下：